反相高效液相色谱法测定烟叶提取物中茄尼醇含量

　　摘要：目的建立烟叶提取物中茄尼醇含量的测定方法。方法选择甲醇-乙醇（1:1）为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长211 nm，柱温30 ℃等条件测定茄尼醇的含量。结果在21.6～216.0 mg/L范围内呈线性关系（r=0.999 9）。平均回收率为98.5%，RSD为0.68%。结论此方法简单、迅速，可用于不同含量茄尼醇样品的测定。
　　关键词：反相高效液相色谱；茄尼醇；含量
　　中图分类号：R917文献标识码：A文章编号：1672-979X(2007)04-0018-02
　　Determination of Solanesol Extracted from Tobacco Leaves by Reversed-phase High-performance Liquid Chromatography
　　WANG Ting, XU Ji-yang*, ZHAO Fang
　　(Biochemistry Teaching and Research Section, China Pharmaceutical University， Nanjing 210009, China)
　　Abstract：Objective To establish a method for the determination of solanesol extracted from tobacco leaves. Methods The mobile phase was a mixture of methanol and alcohol (1:1) with a flow rate of 1.0 mL·min-1, the detection wavelength of 211nm and column temperature of 30 ℃. Results The regression curve was linear between 21.6~216 mg/L (r=0.9999). The average recovery was 98.5% and the RSD was 0.68%. Conclusion The method is simple, quick, and can be used in the determination of solanesol samples with different contents.
　　Key words：reversed-phase high-performance liquid chromatography; solanesol; content
　　
　　茄尼醇（solanesol）是九聚异戊二烯伯醇，四倍半萜烯醇，分子式为C45H74O，相对分子质量为631。它是一种蜡状白色固体，不溶于水，易溶于多种有机溶剂。茄尼醇广泛存在于高等植物、哺乳动物和微生物体内，如烟叶、马铃薯叶和桑叶中，尤其是烟叶中含量高达0.3%~3% [1] 。
　　茄尼醇是药物合成的重要原料，是泛醌类药物不可替代的关键中间体，即辅酶Q10和维生素K2的侧链，也能直接作为药物。测定茄尼醇的方法有薄层扫描法[2]、库仑滴定法[3]、电喷质谱法[4]、串联质谱法[5]、高效液相色谱法[6]等。高效液相色谱法应用最为广泛，但是反相高效液相色谱法应用甚少。我们用反相高效液相色谱法测定样品中茄尼醇的含量，以甲醇-乙醇（1:1）作为流动相。此法操作简单，结果准确，重现性好。
　　
　　1实验部分
　　
　　1.1仪器和试药
　　1.1.1仪器岛津LC-10A高效液相色谱仪，SPD-10AV紫外检测器，C-R6A色谱数据处理机。
　　1.1.2试药茄尼醇样品：烟叶浸膏经过皂化提取，有机溶剂提取，柱色谱，重结晶等所得，为淡黄色粉末状晶体。茄尼醇对照品：自制，系样品经再次重结晶所得，为白色粉末状晶体。经红外、核磁、质谱表征结构无误，高效液相色谱检测为单一峰，薄层色谱法用两种不同展开剂均为单一斑点。甲醇、乙醇均为分析纯。
　　1.2色谱条件
　　色谱柱：VP-ODS柱（250 mm×4.6 mm）；流动相：甲醇-乙醇（1:1）；流速：1.0 mL/min；检测波长：211 nm；柱温：30℃；进样量：2μL。
　　1.3实验方法
　　1.3.1对照品溶液的配制精密称取茄尼醇对照品10.8 mg，用甲醇溶解并定容至25 mL。分别取一定量的茄尼醇对照品溶液用甲醇制成浓度为21.6，43.2，86.4，129.6，172.8，216.0 mg/L的系列对照品溶液。
　　1.3.2样品溶液的配制精密称取茄尼醇样品1.0 mg，用甲醇溶解并定容至10 mL，经0.22μm滤膜过滤后作为测定样液。
　　
　　2结果与讨论
　　
　　2.1色谱条件的选择
　　考察了不同比例的甲醇-乙醇溶液，经过对保留时间和峰对称性的比较，选择甲醇-乙醇（1:1）作为流动相。茄尼醇的最大吸收波长为200 nm，考虑仪器的稳定性等因素，选择211 nm作为检测波长。茄尼醇对照品和茄尼醇样品的色谱图见图1，茄尼醇的保留时间为8.5 min，理论板数为2.5×103。
　　
　　2.2线性关系
　　分别取对照品溶液各20μL，注入液相色谱仪，记录色谱峰面积。以峰面积Y对浓度X（mg/L）作线性回归，回归方程为Y=5687.5X－2474.2，r =0.999 9。结果表明，浓度在21.6～216.0 mg/L时线性关系良好。
　　2.3精密度实验
　　取同一样品溶液，分别进样6次，测定其峰面积，峰面积的相对标准偏差（RSD）为0.41%。
　　2.4重复性实验
　　按照1.3.2的方法重复5次，测定其峰面积，考察方法的可重复性，结果见表1。
　　2.5回收率实验
　　取已知茄尼醇含量的样品6份，精密称定，分别加入茄尼醇对照品0.2，0.4，0.6 mg，按照1.3.2处理，测定峰面积，计算回收率，结果见表2。
　　
　　
　　2.6样品测定
　　精密称取经过一系列步骤提取的烟叶浸膏的非皂化物、有机溶剂沉淀物、柱色谱洗脱物、结晶等样品适量，用甲醇溶解后定容至10 mL，经0.22μm滤膜过滤后测定其含量，结果见表3。
　　
　　
　　参考文献
　　[1]王非，郑珩，余永柱，等. 高纯度茄尼醇的现状与市场前景[J]. 浙江化工, 2005, 36（5）： 25-27.
　　[2]李烈，马振元，钱秋霞，等. 薄层扫描法测定烟叶中茄尼醇的含量[J]. 中草药，2002，33（5）：420-421.
　　[3]刘快之，李德亮，陈伯森，等. 库仑滴定法测定烟叶提取物中茄尼醇[J]. 化学研究，1997，8（3）：56-59.
　　[4]Tucker S P, Pretty J R. Identification of oxidation products of solanesol produced during air sampling for tobacco smoke by electrospray mass spectrometry and HPLC[J]. Analyst, 2005, 130(10): 1414-1424.
　　[5]Watson C, McCraw J, Polzin G, et al. Development of a method to assess cigarette smoke intake[J]. Environ Sci Technol, 2004, 38(1): 248-253.
　　[6]张明时，黄俊学. 高效液相色谱法测定烟叶提取物中茄尼醇的含量[J]. 色谱，2001，19（5）：470-471.

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