中药材中农药残留提取方法比较研究

　　摘要：目的 比较加速溶剂萃取、超声提取和索氏提取法3种常用提取方法对中药材中残留农药的提取差异。方法 用加速溶剂萃取、超声提取和索氏提取分别对含有已知农药残留的中药材进行残留农药提取，经浓硫酸磺化、弗罗里硅土柱净化和凝胶渗透色谱3种净化方法，采用HP-5毛细管色谱柱分离样品，气相色谱-电子捕获检测器测定其农药残留的含量，外标法定量。结果 超声提取的提取率显著低于索式提取、加速溶剂萃取（P<0.05），加速溶剂萃取与索式提取的提取率差异无统计学意义（P>0.05），3种净化方法回收率两两比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论 加速溶剂萃取的提取率最高，其次为索氏提取，超声提取最低。检测者应根据需要选取不同的提取方法。
　　关键词：农药残留；加速溶剂萃取；超声提取法；索氏提取法；中药材
　　中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）04-0089-04
　　中药质量的认识、评价和质量控制是保证中药安全性和有效性的重要手段，在中药研究、生产及临床应用过程中具有非常重要的作用。中药农药残留污染具有普遍性，尤其是有机氯农药，农药残留超标事件对中药出口造成了严重的不良影响。所以应该加快残留农药检测方法和限量标准的研究工作，及时制订管理法规，加大管理执法力度，使相关企业重视并主动避免农药残留超标的现象出现[1]。
　　各种标准、文献[2-6]中检测农药残留的提取方法各不相同，目前大多数检测方法采用添加回收率[7-12]来衡量目标农药是否提取完全，但添加的农药和药材本身吸收的农药状态差异很大，采用添加回收的方法不能明确地反映对药材本身吸收的农药的提取率。本研究以含有已知农药残留的中药材为研究对象，选取常用的3种提取方法和3种净化手段进行不同的组合，对同一样品进行不同前处理方法的农药残留检测，以此对比加速溶剂萃取（ASE）、超声提取（USE）、索氏提取（UE）3种不同方法间的提取率差异，从而为不同检测目的工作人员选择提取方法提供依据。
　　1 仪器与试药
　　美国Agilent 7890气相色谱仪-电子捕获检测器（GC-ECD），HP-5石英毛细管柱（30 m×0.32 mm×0.25 ?m）与DB1701石英毛细管柱（30 m×0.32 mm×0.25 ?m）；美国Dionex ASE-350加速溶剂萃取仪，萃取池体积10 mL；德国LCTech GPC-Ultra凝胶渗透色谱仪，净化柱：400 mm×25 mm glass column，填料50 g Bio-Beads Type S-X3 200-400；浙江省永康市金穗机械制造厂的JSP-750A高速万能粉碎机；瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司PL203/01电子天平；北京天鹏有限公司T-150超声波清洗器；Heidolph公司LABORATA-4000旋转蒸发仪；郑州长城科工贸有限公司SHB-B型循环水式多用真空泵。
　　人参（产地吉林，批号bzrs201008-50）、黄芪（产地内蒙，批号bzhq201010-45）、白菊（产地河北，批号bzbj201003-38），购于亳州药材市场。Florisil硅土柱（1000 mg，6 mL，美国Agilent公司），正己烷（色谱纯，Fisher公司），乙酸乙酯、石油醚、丙酮、无水硫酸钠、正己烷、浓硫酸（分析纯，北京化工厂），乙腈（分析纯，北京化工厂）。农药标准品：六六六（BHC）的3个异构体α-BHC（批号9085027）、β-BHC（批号9086033）、γ-BHC（批号9088040），六氯苯（hexachlorobenzene，批号1912585），五氯硝基苯（quintozine，批号200903），pp’-DDE（批号9081019），反式氯菊酯（trans-permethrin，批号80104），纯度均>99.0%，购于国家标准物质研究中心。
　　2 方法
　　2.1 提取方法
　　将样品在自然条件下阴干后粉碎，过0.24 mm孔径的样品筛，待用。
　　2.1.1 加速溶剂萃取 准确称取样品1.0 g、硅藻土1.0 g（硅藻土起到分散剂的作用），混匀，置于10 mL的萃取池中，待测。ASE系统压力1500 psi，温度100 ℃，加热时间5 min，静态萃取时间5 min，冲洗体积为60%，氮吹60 s，循环2次。提取液在旋转蒸发仪40 ℃水浴中浓缩至近干，待净化。
　　2.1.2 超声提取 准确称取1.0 g样品与1.0 g无水硫酸钠，混匀，置于100 mL具塞三角瓶中，加入提取溶剂30 mL，冰浴提取15 min，将提取液过滤至100 mL茄形瓶中，重复提取1次，合并提取液并在旋转蒸发仪40 ℃水浴中浓缩至近干，待净化。
　　2.1.3 索氏提取 准确称取样品1.0 g与无水硫酸钠1.0 g，混匀，置于滤纸包中，放入索氏提取器中，加80 mL提取溶剂（索氏提取器中30 mL，100 mL圆底烧瓶中50 mL），65 ℃水浴提取30 min，约回流6次，将提取液转移至100 mL茄形瓶中，在旋转蒸发仪40 ℃水浴中浓缩至近干，待净化。
　　2.2 净化方法
　　2.2.1 磺化法 将浓缩后的残渣用正己烷定量转移至具塞刻度试管中，定容至5 mL，再用移液枪加入1 mL浓硫酸，涡旋1 min，3000 r/min离心10 min，取上清液，进气相色谱仪测定。
　　2.2.2 固相萃取法 将浓缩后的残渣，加入1 mL正己烷溶解，将装有1 mL左右高度无水硫酸钠的弗罗里硅土柱置于固定架上，先用10 mL正己烷-乙酸乙酯（85∶15）进行淋洗，当淋洗液近干时快速移入样品浓缩液，用2 mL淋洗液多次充分洗脱茄形瓶并转入柱中，用50 mL茄形瓶收集洗脱液20 mL，在40 ℃水浴旋转浓缩至近干。加入1 mL正己烷（色谱纯）溶解，进气相色谱仪测定。

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