吴茱萸及其习用品药材中7个成分的HPLC含量测定

　　[摘要]建立HPLC同时测定吴茱萸及其习用品药材中柠檬苦素、吲哚类生物碱（14N-甲酰二氢吴茱萸次碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱）及喹诺酮类生物碱（1-甲基-2-正十一烷基-4（1H）-喹诺酮、吴茱萸卡品碱和二氢吴茱萸卡品碱）含量的方法。采用YMC C18 （4.6 mm ×250 mm，5 μm） 色谱柱；流动相为乙腈（A）-四氢呋喃（B）-5 mmol·L^-1醋酸铵缓冲液（pH 3.8）（C），梯度洗脱；流速1.0 mL·min^-1；柱温30 ℃；检测波长220，250 nm。7个成分的分离度良好，标准曲线在检测范围内均呈良好线性，r=0.999 9。加样回收率平均值为96.69%～102.4%，RSD为1.4%～3.1%。该方法简便、准确，重复性好。对5种18批吴茱萸类药材进行含量测定，结果显示7个被测成分在5种药材中均有分布，但含量差异很大。16批正品吴茱萸中7个成分的总质量分数在9.46～69.9 mg·g^-1，平均为28.2 mg·g^-1。密果吴萸中7个成分的总含量为25.8 mg·g^-1，在正品含量范围内，略低于平均值；臭辣吴萸中7个成分的总质量分数为7.69 mg·g^-1，低于正品的含量下限。密果吴萸和臭辣吴萸与正品吴茱萸相比，主要成分一致，含量总体低于正品吴茱萸。
　　[关键词]吴茱萸；柠檬苦素；生物碱；含量测定；高效液相色谱法
　　吴茱萸为传统中药，始载于《神农本草经》，列为中品。其性味辛、苦，热，有小毒；具散寒止痛，降逆止呕，助阳止泻的功效。主要用于治疗厥阴头痛，寒疝腹痛，寒湿脚气等^[1]。1977～2010年版《中国药典》均收载吴茱萸为芸香科植物吴茱萸Evodia rutaecarpa（Juss.） Benth.，石虎E. rutaecarpa（Juss.） Benth. var. officinalis （Dode） Huang或疏毛吴茱萸E. rutaecarpa（Juss.） Benth. var. bodinieri （Dode） Huang的干燥近成熟果实。这3种吴茱萸在中国秦岭以南各地均有分布，是商品药材中的主流品种。同属的密果吴萸E.compacta Hand.-Mazz.和臭辣吴萸E. fargesii Dode也是民间重要药材。密果吴萸为土家族民间常备药，对治疗胃痛、头痛、心腹气痛有良效^[2]。湖北民间有用臭辣吴萸的果实做吴茱萸代用品，也有认为本种的果与吴茱萸具有相同药效^[3]。吴茱萸的基源多样性及分布广泛性造成了各地吴茱萸的质量差异。关于密果吴萸和臭辣吴萸的主要成分与正品吴茱萸相比是否一致，未见相关报道。
　　吴茱萸的质量评价研究报道很多，但所选指标基本集中于吴茱萸碱、吴茱萸次碱和柠檬苦素^[4-5]。2010年版《中国药典》将这3个成分作为药材质量评价的指标成分。吴茱萸主要含生物碱类（吲哚类和喹诺酮类）、柠檬苦素类、黄酮类、挥发油类等化学成分^[6]。Zhao Meng-yao等测定了12批吴茱萸中去氢吴茱萸碱等6个吲哚类生物碱的含量^[7]。除吴茱萸碱等吲哚类生物碱外，喹诺酮类生物碱同样是吴茱萸中含量较高的一类有效成分，存在于提取物的脂溶性部位。文献报道吴茱萸中喹诺酮类生物碱具有抗幽门螺杆菌^[8]，抑制白三烯生物合成^[9]，抑制血管紧张素Ⅱ受体结合等作用^[10]，与吴茱萸的传统功效具有相关性。因此，喹诺酮类生物碱也应是吴茱萸的药效成分之一，而该类成分因对照品缺乏而被忽略，其含量测定研究仅零星报道，如Wu Chang-chuang等测定了33批市售吴茱萸样品中11个喹诺酮类生物碱的含量^[11]。为了全面评价吴茱萸及其主要习用品的质量，本文以《中国药典》收录的吴茱萸3种正品、臭辣吴萸、密果吴萸5种18批样品为研究对象，以柠檬苦素，吲哚类生物碱（14N-甲酰二氢吴茱萸次碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱），喹诺酮类生物碱（1-甲基-2-正十一烷基-4（1H）-喹诺酮、吴茱萸卡品碱、二氢吴茱萸卡品碱）7个主要成分的含量为评价指标，对目前我国吴茱萸主产地药材和2批习用品药材进行系统比较，以探讨其品质差异，为进一步完善吴茱萸的国家标准提供基础性研究证据。
　　1材料
　　岛津LC-20AT高效液相色谱系统，包括四元梯度洗脱泵、自动进样器、柱温箱和二极管阵列检测器（日本岛津公司），KQ-250DBX型数控超声波清洗仪（ 昆山市超声仪器有限公司），XS105型1/10万电子天平（ 瑞士梅特勒-托利多有限公司）。FW100高速万能粉碎机（天津泰斯特仪器有限公司）。
　　柠檬苦素（批号110800-200404，纯度大于95%） 对照品购自中国食品药品检定研究院，供含量测定用。14N-甲酰二氢吴茱萸次碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、1-甲基-2-十一烷基-4（1H）-喹诺酮、吴茱萸卡品碱和二氢吴茱萸卡品碱对照品为作者自制，并经MS，NMR鉴定结构，HPLC检测，面积归一化法计算纯度均大于98%。甲醇、乙腈、四氢呋喃为色谱纯（美国Fisher公司），水为娃哈哈纯净水，其他试剂均为分析纯。
　　实验用药材共18批见表1。密果吴萸由湖南中医药大学林丽美副教授采集于衡山并鉴定。其余样品由作者实地采集或购买，实地采集的样品均由中国医学科学院药用植物研究所林余霖研究员鉴定，购买的4批商品药材由作者根据性状、产地、化学成分等信息进行鉴定。标本保存于中国中医科学院中药研究所质量标准研究中心。
　　2方法与结果
　　2.1色谱条件 YMC C18色谱柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）；流动相为乙腈（A）-四氢呋喃（B）- 5 mmol·L^-1醋酸铵缓冲液（pH 3.8）（C）；梯度洗脱（0～10 min，21%～23%A，10%B；10～30 min，23%～24%A，10%B；30～45 min，24%～26%A，10%B；45～50 min，26%A，10%B；50～53 min，26%～60%A，10%B；53～68 min，60%A，10%B；68～70 min，60%～80%A，10%B；70～80 min，80%A，10%B）；流速1.0 mL·min^-1；柱温30 ℃； 检测波长220，250 nm。在上述色谱条件下，样品中柠檬苦素、14N-甲酰二氢吴茱萸次碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、1-甲基-2-十一烷基-4（1H）-喹诺酮、吴茱萸卡品碱和二氢吴茱萸卡品碱色谱峰的保留时间与对照品一致，7个成分的色谱峰能达到较好的分离，且纯度检查符合要求，样品其他成分对欲测成分的测定无干扰。吴茱萸样品（贵州余庆）色谱图见图1。密果吴萸及臭辣吴萸的色谱图见图2。

相关热词搜索：吴茱萸 测定 药材 含量 成分