茶叶中6种主要儿茶素的高效液相色谱方法建立及应用

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　　摘 要：茶叶是有益人身体健康的最佳饮料，通过现代的医学临床证明，茶叶中的儿茶素对茶叶中多酚类物质高效清除自由基能力起着重要决定作用，通过加强对其相关理论的研究能够更深层次的了解茶叶的功效原理。本文主要就茶叶中六种主要儿茶素的高效液相色谱方法进行构建并对其实际应用详细分析探究，希望此次理论研究对实际操作能起到一定指导作用。
　　关键词：茶叶;儿茶素;高效液相色谱
　　0 引言
　　 古代，茶被誉为是万病之药，茶不仅能够用来解渴，而最为重要的就是其组成的成分对人的身体健康有着促进作用，有着多种医疗保健的功能。我国有着丰富的茶叶资源，而将这些资源的作用得到充分发挥就是当前茶叶深加工领域的重要研究对象。在这一发展背景下对茶叶中的一些主要成分加强研究就有着其实质性意义。
　　1 儿茶素检测方法及高效液色谱分离
　　1.1 儿茶素检测方法分析
　　 针对茶叶中的儿茶素进行检测其方法是多样的，其中的气相色谱法是能够快速定量以及分析方便的方法，在这一方法作用下对茶叶儿茶素进行分析，常用衍生化试剂来改善样品预处理方法，这样能够让儿茶素衍生的更加彻底。对茶叶成分的组成进行详细分析并对其质量进行评估，通过溶剂的提取方法能够起到有效的作用，这一方法的应用主要就是采取水溶剂以及甲醇溶剂和乙醇溶剂等，运用这一方法能够将儿茶素从茶叶的基质当中得到有效的提取出来。除了以上这一方法外，通过超声波萃取法也比较有效，这主要是通过超声波技术的实际应用所产生空化作用，从而就能够将其在物质化学成分的提取作业当中加以应用[1]。
　　1.2 茶叶中六种主要儿茶素高效液相色谱分离
　　 高效液相色谱法能够按照固定相以及流动相极性强弱分成正、反相液色谱法，而样品的性质则决定着最终的分离模式。首先从反相高校液色谱法的层面进行实施分析，在这一分离措施下主要是通过水以及甲醇等作为是有机溶剂，这些溶剂主要是为了能够对流动相溶剂的强度进行有效调节。在这一过程中，给予在流动相极性要比固定相极性大很多，而在样品的分子在这一过程中的分配和保留的化合物就相对比较强，从而就能够反映出极性如果是比较大的话，那么在物质方面就会先出峰，相反，倘若是极性相对比较小就是后出峰[2]。
　　2 六种儿茶素提取量的影响因素及HPLC方法应用
　　2.1 六种儿茶素提取量影响因素分析
　　 六种儿茶素提取量的影响因素是多方面的，主要体现在实践对其产生的影响，溶剂提取中所需的时间愈长提取的就会愈充分，而儿茶素较为容易氧化，同时也可能在长时间提取中受氧化造成提取量的降低，根据相关的实验就能够看到，六种儿茶素总量在四十到五十分钟的时候值最大。从而就能够看出，这主要是与茶叶中的儿茶素氧化存在着一定的关联，在一段时间后，随着提取的时间不短的增加，那么在茶叶中的儿茶素氧化的速率也会比溶出的速率要大很多。
　　 另外茶叶中儿茶素的料液对儿茶素的提取也会有着相应的影响，在含量超过相应的标准时那么有限儿茶素含量就会由于过量溶剂稀释对其精密度造成影响，同时也会对溶剂造成浪费的现象。除此之外，抗氧化剂自身的含量多少对其也会产生相应影响，因为儿茶素在温度相对较高的情况下就比较容易发生氧化，温度低的条件下的提取量也会因此而降低，对其含量的测定就会有着很大的难度。结合基质当中成分含量的也正通过这一水溶液对茶叶儿茶素进行提取对方法建立难度不会受到影响。
　　2.2六种主要儿茶素HPLC方法应用
　　 对茶叶中的六种儿茶素进行方法验证的过程中，要能够采取具体的措施，要能对其加强在实验层面的投入。通过高效液相色谱仪四元泵， DAD二极管阵列检测器; G1969A ESITOF -MS电喷雾飞行时间质谱仪;MIKRO 22R冷冻离心机;MilliQ-50超纯水系统等[3]。然后对样品进行有效的处理，首先就是要称取0.5克的茶叶样品，将其放置在100升的锥形瓶当中，再进行加入五十毫升的九十摄氏度的热水，进行震荡，在沉浸十分钟之后进行离心旋转十分钟，接着进行获取十毫升上层清液放置在五十毫升的容量瓶当中，最后采用纯水进行稀释，对稀释的程度达到0.45微米微孔滤膜即可待测。
　　 接着就是对色谱自身的所需要保持的条件，在这一方面要能够充分重视，色谱柱Sinochrom ODS -BP416mm i.d×200mm，5μm，其中的流动相A、B分别是甲醇以及一定量的三氟乙酸水溶液。在洗脱的程序上主要是先对百分之十三的甲醇溶液进行五分钟的洗脱，等待十分钟再对百分之二十的甲醇=容易洗脱五分钟，依次是百分之四十，百分之八十，在流速上要保持每分钟0.8毫升，在这些操作都完成之后再取样十微升[4]。
　　 试验方法在进行验证后就能实施日常应用，从具体的措施实施情况来看，主要是把建立的实验方法用在茶叶样品当中的六种儿茶素含量测定，这也是方法建立比较根本的一个目的。从准确度以及精密度方面来看，对准确度的确定方式有回收测定掺入空白基质中的被测物，和参比标准品进行比较以及被测物标准品加入法。精密度主要是在重复使用这一操作步骤的时候，对一均匀样品实施多次的抽样测定，而在各测定结果间的一致程度。
　　3 结语
　　 总而言之，针对茶叶中的六种主要儿茶素的研究通过其专属性以及定量限等对各个物质的含量以及样品处理方法有着相应的说明。而研究中的方法验证是检验及完善方法比较重要的一个内容，所以要能够通过多种方法进行实际的验证。此次的理论研究由于受到文章的篇幅限制，仅从侧面进行了相应的反映，希望此次的理论分析能在思路上提供理论依据，借此希望能够对其发展有所裨益。
　　参考文献：
　　[1]郑清梅，陈昆平，钟艳梅，韩春艳，张子容，郑佳玲.4类茶叶及其茶渣主要成分的测定与分析[J]. 广东农业科学，2015（06）.
　　[2]卢涛，兰先秋，朱斌，罗安林，宋航.不同茶多酚中儿茶素的测定及柱层析法提取EGCG的比较[J].化工进展，2013（05）.
　　[3]王传金，魏运洋，朱广军，杜杨艳.聚酰胺色谱法分离制备高纯度表没食子儿茶素没食子酸酯[J].应用化学，2013（04）.

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