平喘巴布剂药材的提取工艺研究

　　[摘要] 目的 优选平喘巴布剂药材的提取工艺。 方法 采用L9（34）正交试验法，对药材乙醇提取时间、乙醇用量、乙醇浓度和提取次数等影响因素，以芥子碱硫氰酸盐提取率为考察指标，优选平喘巴布剂药材提取工艺。 结果 最佳提取工艺为用6倍量70%的乙醇回流提取2次，每次2 h。 结论 优选的提取工艺合理，为该复方的透皮吸收特性的研究奠定良好的基础。
　　[关键词] 平喘巴布剂；提取工艺；芥子碱硫氰酸盐；正交试验
　　[中图分类号] TQ461 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）10（b）-0108-04
　　平喘巴布剂源于《张氏医通》，是由芥子、延胡索、甘遂、细辛等几味药材组成，具有利气祛痰散寒逐饮之效，多用于穴位敷贴防治哮喘，属于经皮给药系统，疗效确切，且在临床上具有广泛的应用基础[1-2]。在经皮给药制剂中，确保足够量的药物透过皮肤进入体内达到有效的血药浓度是关键，方中芥子、延胡索、甘遂、细辛的主要活性成分均适合于乙醇提取[3-6]，而芥子又为方中君药，主要含季铵盐生物碱芥子碱类成分，广泛存在于十字花科植物中，代表性分是芥子碱，多以硫氰酸盐形式存在，芥子碱硫氰酸盐（Sinapine thiocyanate，ST）具有镇咳、祛痰、平喘、抗氧化、抗衰老、抗雄激素、降血压等多种生物活性[3-7]。因此本研究采用正交试验法，以芥子碱硫氰酸盐的提取率为指标，优选药材乙醇提取工艺，确定最佳提取条件，为平喘巴布剂体内外透皮吸收特性的研究奠定物质基础。
　　1 仪器与试药
　　1.1 药品与试剂
　　芥子碱硫氰酸盐对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111702-201002）；芥子、延胡索、甘遂、细辛等（广州致信中药饮片有限公司）；磷酸二氢钾、乙醇为分析纯；甲醇、乙腈为色谱纯；水为怡宝水。
　　1.2 仪器
　　LC-20AT高效液相色谱仪（日本岛津公司）；高速中药粉碎机（浙江瑞安市永历制药机械有限公司）；旋转蒸发仪（上海青浦沪西仪器厂）；KQ-500型超声清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；AUW120D精密分析天平（日本岛津公司）。
　　2 方法与结果
　　2.1 含量测定方法的建立
　　2.1.1 色谱条件
　　色谱柱：迪马Platisil ODS柱（5 μm，250 mm×4.6 mm），以Phenomenex为保护柱；流动相：乙腈-0.1 mol/L的磷酸二氢钾=14∶86；检测波长：326 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：室温；进样量：10 μL。理论塔板数按芥子碱硫氰酸盐峰计算不低于3000。
　　2.1.2 溶液的配制
　　2.1.2.1 对照品溶液的配制 精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的芥子碱硫氰酸盐对照品5.67 mg，于100 mL的容量瓶中，用流动相溶解制成56.7 μg/mL的对照品溶液。
　　2.1.2.2 对照药材溶液的制备 精密称取芥子对照药材细粉1.12 g，置具塞的锥形瓶中，加甲醇50 mL，超声（功率250 W，频率20 KHz）提取3次，每次20 min，滤过，滤液减压回收溶剂至干，残渣用流动相溶解并转移至50 mL的容量瓶中，定容，再用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
　　2.1.2.3 供试品溶液的制备 按照处方比例称取芥子、延胡索、细辛和甘遂，9份，分别按L9（34）正交试验表进行实验，每次提取后趁热过滤，药液用旋转蒸发仪浓缩至药材量1∶1的浓缩液，放至室温后，加水定量至20 mL。然后精密吸取1～9号提取液各0.2 mL，置10 mL的容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，再用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得1～9号正交试验的供试品溶液。
　　2.1.2.4 阴性样品溶液的制备 按处方比例称取除芥子外的其他药材，与供试品溶液同法制备。
　　2.1.3 方法学考察
　　2.1.3.1 线性范围考察 分别精密吸取上述芥子碱硫氰酸盐对照品溶液2、6、10、15、20 μL进样，测定，以芥子碱硫氰酸盐峰面积积分值为纵坐标，以进样量为横坐标，绘制标准曲线，线性回归分析，得标准曲线方程：Y = 3×106X - 29 592，r = 0.9999。结果表明芥子碱硫氰酸盐进样量在0.1134～1.1340 μg 范围内与其峰面积积分值呈良好的线性关系。
　　2.1.3.2 精密度试验 精密吸取芥子碱硫氰酸盐对照品溶液10 μL，连续进样6次，测定，按芥子碱硫氰酸盐的峰面积积分值计算RSD为0.58%，表明该仪器具有良好的精密度。
　　2.1.3.3 稳定性试验 精密吸取正交试验5号供试品溶液10 μL，分别于0、2、4、8、12 h进样，测定芥子碱硫氰酸盐峰面积，计算其RSD为1.08%，表明样品溶液在12 h内稳定。
　　2.1.3.4 重复性试验 取正交试验5号浓缩液，加水定容至20 mL，再精密吸取0.2 mL，5份，按“2.1.2”项下供试品溶液制备方法，制备样品，分别进样10 μL，测定，计算芥子碱硫氰酸盐含量平均值为0.536%，RSD为1.06%。结果表明方法重复性良好。
　　2.1.3.5 加样回收率试验 精密吸取正交试验3号提取液0.2 mL，6份，分别加入芥子碱硫氰酸盐对照品溶液0.1、0.2和0.4 mL，置10 mL的容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，再用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液为加样回收供试液，分别进样测定，计算回收率分别为99.35%（RSD = 2.73%），101.66%（RSD =2.13%），99.76%（RSD = 1.86%）。结果表明，该分析方法的回收率符合要求。
　　2.1.4 样品分析

相关热词搜索：平喘 药材 提取 巴布 工艺