ＧＡＰ基地与其他产地栀子药材中西红花苷－１含量的对比研究

　　[摘 要] 目的 以西红花苷-1含量为指标，评价GAP基地栀子药材的质量，并与其他产地药材进行比较。方法 运用HPLC法，色谱柱：Kromasil C18柱；流动相：水－甲醇梯度洗脱(60：40至0：100)；检测波长：440nm；流速：1.0ml·min-1。结果 GAP药材基地栀子中西红花苷-1含量比其他产地的要高，含量波动小。结论 GAP基地栀子药材质量好，且较稳定，其他产地栀子药材质量不稳定。
　　关键词：GAP HPLC 栀子 西红花苷-l
　　中图分类号：R284.1文献标识码：A文章编号：1672-5085（2007）7-0107-03
　　
　　栀子为茜草科植物Gardenia jasminoides Eills的干燥成熟果实，是传统中药，具泻火除烦，清热利尿，凉血解毒的功效[1]。栀子的主要有效成分为栀子苷、西红花苷类[2,3]，西红花苷类是西红花、栀子中共有的色素部分，在治疗或预防心脑血管疾病及癌症等方面具有明确的药理效应[4]。栀子生长地区广泛，主产于浙江、江西、湖北、湖南等地，不同地区产的栀子质量参差不齐，本文通过对GAP基地及湖南、江西等不同产地栀子的西红花苷-1含量进行检测并比较，为不同来源药材的质量控制提供一种可靠的方法，也为制剂生产厂家优选货源提供参考。
　　
　　1 仪器与试药
　　
　　1.1 仪器
　　日本岛津高效液相色谱仪（LC－10AT泵，SPD－10A紫外检测器）；N2000色谱工作站（浙江大学智能信息研究）；KQ－250E型医用超声波清洗器(500W，40kHz)，FA1104电子分析天平。
　　1.2 试剂
　　甲醇为色谱纯；水为双重蒸馏水(自制)。
　　1.3 样品
　　规范化基地样品采集于江西（樟树、新干）GAP栀子种植基地，湖南不同产地样品由当地农民带领采集，其它样品均在各产地购买。经湖南中医药大学周日宝教授鉴定均为茜草科植物Gardenia jasminoides Ellis的成熟果实。
　　1.4 对照品
　　西红花苷-1(成都普思生物科技有限公司提供，纯度>98%，HPLC)
　　
　　2 方法与结果
　　
　　2.1 色谱条件
　　色谱柱为kromasil C18柱(4.6×250mm，5µm)；流动相：水－甲醇梯度洗脱(60：40至0：100)，洗脱时间60min；流速l.0ml·min-1；柱温35℃；检测波长440nm；进样量20µl。此条件下供试品中西红花苷-l与其他组分均能达到基线分离，西红花苷-1保留时间为24.5 min(图1、2)
　　
　　2.2 供试品制备
　　将栀子药材50℃减压干燥24h，粉碎，过20目筛，精密称取约0.1g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，密塞，称重，超声处理30min，放冷，再称重，用50%甲醇补足减少的重量，摇匀，用微孔滤膜(0.45µm)滤过。
　　2.3 线性关系考察
　　精密称取一定量西红花苷-l对照品分别溶于甲醇，配制成4.9、9.8、19.6、39.2、78.4、98µg·ml-1的对照品溶液，分别进样20µl，按上述色谱条件注入色谱仪，测定峰面积，平行测定3次，以峰面积A为纵坐标，西红花苷-l浓度C(µg·m1-1)为横坐标绘制标准曲线，建立回归方程为：Y=1.72×107C－6.80×103，r=0.9999（n＝6）。结果表明：西红花苷-l在4.9～98µg·ml-1的范围内，其浓度与色谱峰面积呈良好的线性关系。
　　2.4 精密度试验
　　准确吸取对照品溶液（19.6µg·ml-1）20µl，重复进样6次，记录峰面积。结果RSD为1.26%，说明其精密度良好。
　　2.5 重复性试验
　　取湖南涟源样品5分，分别按上述供试品制备法制备，并按上述色谱条件测定，记录峰面积。结果RSD为1.18%，说明其重现性良好。
　　2.6 稳定性试验
　　取同一供试品溶液，分别在0，2，4，8，10h分别进样2Oµl，按上述色谱条件测定，记录峰面积。结果RSD值为1.35%，结果表明，供试品溶液在10h之内稳定。
　　2.7 加样回收率试验
　　精密称取已测得含量的样品0.05g，分别精密加入西红花苷-l对照品溶液适量，挥干溶剂，按供试品制备方法制备供试液，测定并计算回收率。结果见表1。
　　
　　2.8 供试品测定及结果
　　精密吸取对照品溶液与不同产地的供试品滤液各20µl，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件，以外标法测定并计算样品含量。结果见表2。
　　
　　3 讨论
　　
　　分别考察了甲醇、50%甲醇、乙醇、50%乙醇4种比例溶剂的提取效果，结果表明，50%甲醇提取率最高，故选其作提取溶剂。提取方法分别考察了超声提取与加热回流两种方式，提取效率相当，考虑到操作简便，故采用超声提取。
　　从实验结果可看出，GAP基地产出的栀子药材中西红花苷-l含量都在1.18%以上，RSD最高1.01%，说明质量较好、稳定，而其他产地产出栀子药材中西红花苷-l含量最高才1.14%，RSD从0.98%到2.48%，表明质量较差，且波动大，从一定程度上说明建立GAP药材生产基地能有效的提高并控制药材的质量。
　　
　　参考文献
　　[1] 中国药典[S].一部.2005,173.
　　[2] 刘璇,钱之玉,付健.西红花苷-l的高效液相色谱测定[J].中国药科大学学报,1996,27(12)：734.
　　[3] 曹敏,陈玉英.栀子药材红花苷类HPLC指纹图谱的研究[J].中国新药杂志,2003,12(7)：553.
　　[4] 邓颖,郭志刚,曾兆麟,等.藏红花的药理研究进展[J].中国中药杂志,2002,27(8)：565～568.
　　
　　注：“本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文”

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