HPLC测定白芷药材中欧前胡素与异欧前胡素的含量

　　[摘要] 目的：建立白芷中欧前胡素与异欧前胡素的高效液相色谱含量测定方法。方法：色谱柱Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以甲醇-水（70∶30）为流动相，检测波长254 nm，流速1.0 ml/min。结果：欧前胡素在0.094 8~0.853 2 μg/ml具有良好的线性关系(r=0.999 8)，异欧前胡素在0.150 0~1.350 0 μg/ml内具有良好的线性关系（r=1.000 0）。欧前胡素的平均回收率为98.0%，RSD=0.7%；异欧前胡素的平均回收率为99.0%，RSD=1.1%。结论：本法简便、快速、准确，可用于白芷中欧前胡素与异欧前胡素的含量测定。
　　[关键词] 含量测定；白芷；高效液相色谱法
　　[中图分类号] R917 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2011）06（c）-074-02
　　
　　Determination of imperatorin and isoimperatorin in Radix Angelicae Dahuricae by HPLC
　　WANG Yunlong,YANG Lizhi, JIANG Xuemin,XU Shiwei,SHAO Limei
　　Jixi Institute for Drug Control, Jixi158100,China
　　[Abstract] Objective: An HPLC method was established for the simultaneous determination of imperatorin and isoimperatorin in Radix Angelicae Dahuricae. Methods: The separation was performed on a Agilent ZORBAX SB-C18 column (4.6 mm×250 mm, 5 μm) using methanol-water (70∶30). The UV detection was set at 254 nm; flow rate was 1.0 ml/min. Results: There was good linearity between the peak area and concentration at the ranges of 0.094 8-0.853 2 μg/ml (r=0.999 8), 0.150 0-1.350 0 μg/ml(r=1.000 0) for imperatorin and isoimperatorin respectively. The average recoveries of imperatorin and isoimperatorin were 98.0%(RSD=1.0%) and 99.0%(RSD=0.5%). Conclusion: The method is rapid, simple and accurate for the content determination of imperatorin and isoimperatorin in Radix Angelicae Dahuricae.
　　[Key words] Content determination; Radix Angelicae Dahuricae; HPLC
　　
　　白芷收载于《中国药典》2010年版一部，来源为伞形科植物白芷Angelica dahurica (Fisch. ex Hoffm.)Benth. et Hook. f. 或杭白芷Angelica dahurica (Fisch. ex Hoffm.) Benth. et Hook. f. var. formosana (Boiss.) Shan et Yuan 的干燥根。性温味辛，归胃、大肠、肺经。具有散风除湿、通窍止痛、消肿排脓的功效。用于治疗感冒头痛、眉棱骨痛、鼻塞、鼻渊、牙痛、白带、疮疡肿痛。《中国药典》2010年版一部[1]仅对白芷中欧前胡素进行了含量测定，文献报道[2-3]的方法虽对两种成分同时进行含量测定，但前处理方法繁琐。本文采用高效液相色谱法同时测定白芷药材中欧前胡素与异欧前胡素的含量，方法简便、快速、专属性强、分离度高，可作为白芷药材的质量控制方法。
　　1仪器与试药
　　HP1100高效液相色谱仪，配置四元泵、紫外检测器、自动进样器、柱温箱、HP Chemstation色谱工作站；AG285电子分析天平、欧前胡素与异欧前胡素为中国药品生物制品检定所提供，水为重蒸馏水，甲醇为色谱纯。白芷药材购于药店。
　　2方法与结果
　　2.1 色谱条件
　　色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18（5 μm，4.6 mm×250 mm），检测波长：280 nm，流动相：甲醇-水（70∶30），流速：1 ml/min，柱温：35℃，进样量20 μl。
　　2.2 溶液的制备
　　2.2.1 对照品溶液的制备 分别精密称取欧前胡素与异欧前胡素9.48 mg、15.00 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
　　2.2.2 供试品溶液的制备 取样品1粉末（过三号筛）约1.0 g，精密称定，置50 ml量瓶中，加甲醇45 ml，超声处理（功率300 W，频率50 Hz）30 min，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
　　2.3 线性关系考察
　　精密吸取欧前胡素和异欧前胡素的对照品混合溶液0.5、1.5、2.5、3.5、4.5 ml，置10 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，按上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录峰面积，以浓度为横坐标X（μg/ml），相应成分峰面积为纵坐标Y，进行线性回归，欧前胡素0.094 8~0.853 2 μg/ml内具有良好的线性关系，回归方程为Y=4.003×103X+16.5，r=0.999 6；异欧前胡素在0.150 0~1.350 0 μg/ml内具有良好的线性关系，回归方程为Y=4.242×103X+16.917，r=0.999 8。
　　2.4 精密度试验
　　按上述色谱条件，以对照品混合溶液连续进样5次，以峰面积计算，欧前胡素的RSD=0.3%，异欧前胡素的RSD= 0.5%。
　　2.5 稳定性试验
　　取供试品溶液，在室温下放置，按上述色谱条件，分别在0、2、4、6、8 h测定，以峰面积计算，欧前胡素的RSD=0.4%，异欧前胡素的RSD=0.8%，表明供试品溶液在8 h内稳定。
　　2.6 重复性试验
　　同一批白芷，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液5份，在上述色谱条件下测定，测得欧前胡素的RSD=1.8%，异欧前胡素的RSD=1.7%。
　　2.7 回收率试验
　　取已知含量的供试品5份，每份0.5 g，精密称定，置5个25 ml量瓶中，分别精密加入上述对照品溶液5 ml，加甲醇稀释至刻度，在上述色谱条件下测定，计算回收率，欧前胡素的平均回收率为98.0%，RSD=1.0%；异欧前胡素的平均回收率为99.0%，RSD=0.5%，结果见表1。
　　
　　
　　2.8 样品的测定
　　取5批供试品，按“2.2.2”制备供试品溶液，在上述色谱条件下测定，结果见表2，典型色谱图如图1所示。
　　
　　3 讨论
　　3.1提取方法的选择
　　本研究比较了超声提取法与回流提取法对欧前胡素与异欧前胡素提取率的影响，回流提取与超声提取无明显差异，因超声法简便，故采用超声提取法。
　　3.2色谱条件的选择
　　对流动相甲醇-水的比例进行的考察结果表明，甲醇-水（80∶20）时，欧前胡素、异欧前胡素与其他组分分离效果不好；甲醇-水（50∶50）时，洗脱时间较长。故选择甲醇-水（70∶30）作为流动相，分离度良好，保留时间适宜。柱温分别考察了25℃、30℃、35℃，结果表明35℃时柱压较小，分离效果好。
　　[参考文献]
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　　[4] 胡华杰,楼招欢,吕圭源,等.HPLC测定不同产地白芷饮片中欧前胡素和异欧前胡素的含量[J].浙江中医药大学学报,2010,34(3):418-419.
　　[5] 樊平,孙宁,刘冰,等.HPLC法测定白芷酊中欧前胡素的含量[J].中国药房,2010,21(23):2179.
　　[6] 张慧,海广泛,尹志奎,等.高效液相色谱法测定不同产地白芷中欧前胡素和异欧前胡素含量[J].新乡医学院学报,2009,26(2):138-140.
　　（收稿日期：2011-03-07）
　　[通讯作者] 王云龙（1978-），男，本科，黑龙江省鸡西市人，从事中药质量检验。

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