RP—HPLC测定不同产地白蔹药材中没食子酸的含量

　　摘要 [目的]建立白蔹药材中没食子酸的RP-HPLC含量测定方法，为白蔹药材的质量标准研究提供依据。[方法]采用Dikma Diamonsil C18（250×4.6 mm，5 μm）色谱柱，以乙腈- 0.2%磷酸（3∶97）为流动相进行等度洗脱。流速为1.0 ml/min，柱温为30 ℃，检测波长为270 nm。[结果]没食子酸检测浓度在3.15～202 μg/ml的范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系（R2=0.999 9）；平均回收率为102.8%，RSD为1.15%。[结论]该方法快速，重现性好，准确度高，操作简便，可用于白蔹药材的质量控制。
　　关键词 白蔹；没食子酸；反相高效液相色谱法；质量控制
　　中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2015）04-108-03
　　白蔹（Ampelopsis japonica（ Thunb·）Makino），葡萄科植物，又名野葡萄秧、鹅抱蛋、白草等。据《中药大辞典》记载，白蔹以块根入药，具有清热解毒、生肌止疼、消肿的功效，既可内服，又可外敷，主要用于医治痈肿疮疡、烫伤、扭挫伤等[1-2]。临床广泛应用于治疗化脓性皮肤感染、细菌性痢疾等疾病，疗效显著[3-4]。现代研究表明白蔹中主要含有没食子酸、大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、芦荟大黄素、羽扇豆醇等化合物，没食子酸为白蔹中抗菌、抗病毒的主要药效成分，且其含量较高[5-6]。目前在药典中，白蔹药材的质量标准只有定性分析而无定量分析。为更好地控制白蔹生药材质量，更好地利用白蔹生药资源和适应中药现代化的发展要求，该研究基于2015年版《中国药典》科研课题，采用定量研究白蔹中没食子酸含量的高低来评价白敛生药材质量，以期为制定白蔹药材的质量标准研究提供科学依据。
　　1 材料与方法
　　1.1 材料
　　1.1.1 研究对象。白蔹干燥药材由第二军医大学附属长征医院药材科提供，经第二军医大学长征医院陈万生教授鉴定为白蔹A.japonica。
　　1.1.2 主要仪器。Agilent 1260 HPLC系统（Agilent Technologies，美国），包括G1311A四元泵、G1322A真空脱气机、G1329A自动进样器、G1316A柱温箱和G4212B DAD检测器，使用Chem Station软件数据处理系统；BAS124S-CW万分之一电子分析天平（Sartorius，德国）；BP110S十万分之一电子分析天平（Sartorius，德国）；XW-01定时可调速漩涡混合器（上海医科大学仪器厂）；KUDOS SK7200H 超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）；TDL-4A 低速离心机（上海菲恰尔分析仪器有限公司）；AG 22331 Humberg超高速离心机（Eppendorf，德国）；Eppendorf Research plus 可调量程移液器（Eppendorf，德国）。
　　1.1.3 主要试剂。没食子酸对照品（中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号110831-201204）；甲醇和乙腈均为色谱纯试剂（Fisher Scientific，美国）；甲酸和磷酸均为色谱级试剂；水为超纯水。
　　1.2 方法
　　1.2.1 对照品溶液的制备。精密称取没食子酸对照品适量，加50%甲醇溶液制成每1 ml含202 μg的溶液，即得。
　　1.2.2 供试品溶液的制备。取本品粉末（过四号筛）5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 ml，密塞，称定重量，超声处理60 min后，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
　　1.2.3 色谱分析条件。色谱柱Dikma Diamonsil C18（250×4.6 mm，5 μm），柱号99903；乙腈-0.2%磷酸（3∶97）为流动相；流速1.0 ml/min，柱温30 ℃，检测器为DAD，波长为270 nm。
　　1.2.4 方法学考察。
　　1.2.4.1 系统适应性试验。分别吸取对照品溶液及供试品溶液各10 μl，在“1.2.3”色谱条件下，注入液相色谱仪进行测定，记录色谱图，考察系统适应性。
　　1.2.4.2 线性关系的考察。将没食子酸对照品贮备液用50%甲醇稀释制成每1 ml含202、 101、50.5、25.25、12.625、6.312 5、3.156 25 μg的系列溶液，分别吸取10 μl注入液相色谱仪，记录色谱图，以进样浓度X（μg/ml）为横坐标、峰面积Y为纵坐标绘制标准曲线，计算线性回归方程。
　　1.2.4.3 检测限和定量限的考察。将没食子酸对照品逐步稀释后进样测定，以色谱图中信噪比（S/N）为3时的进样量为最低检测限（LOD），信噪比（S/N）为10时的进样量为最低定量限（LOQ）。
　　1.2.4.4 稳定性试验。取同一供试样品溶液，按“1.2.3”项色谱分析条件分别于0、4、8、12、24 h进样，进样量10 μl，测定峰面积积分值，计算RSD。
　　1.2.4.5 精密度试验。取按“1.2.1”方法制备的对照品溶液重复进样6次，计算峰面积的RSD值。
　　1.2.4.6 重复性试验。取同一批号的样品按“1.2.2”方法制备供试品溶液6份（样品批号为白蔹02），按“1.2.3”项下色谱分析条件，进样量为10 μl，测定峰面积，计算平均含量和RSD。
　　1.2.4.7 加样回收试验。取同一批号已知含量的样品6份（样品批号为白蔹02），精密加入分别与样品中没食子酸含量相等的对照品，按“1.2.2”方法制备供试品溶液，再按“1.2.3”项下色谱条件测定，进样量为10 μl，测定峰面积，计算平均回收率和RSD。

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