HPLC测定野菊花药材中8种黄酮和有机酸的含量

　　[摘要] 建立同时测定野菊花药材中绿原酸、咖啡酸、1，3-二咖啡酰奎宁酸、3，5-二咖啡酰奎宁酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、3，4-二咖啡酰奎宁酸、蒙花苷及木犀草素等8 种成分含量的方法。采用HPLC，Shim pack VP-ODS色谱柱（4.6 mm×250 mm， 5 μm）；以甲醇（A）-0.3%磷酸水溶液（B）为流动相，梯度洗脱，流速1.0 mL·min^-1；检测波长326 nm；柱温35 ℃。8种成分在40 min内均达到基线分离，线性关系良好（r>0.999 5， n=7）；平均回收率均在97.03%～102.3% （RSD<2.0%，n=6）。结果表明该方法操作简单，准确性和重现性良好，为野菊花药材的质量控制提供科学依据。
　　[关键词] 野菊花；高效液相色谱法；黄酮；有机酸；含量测定；质量标准
　　野菊花为菊科植物野菊Chrysanthemum indicum L.的干燥头状花序，具有清热解毒、疏风平肝之功效，用于疔疮、痈肿、丹毒、风热感冒、咽喉肿痛、高血压、眩晕、头痛等。野菊花中富含黄酮类、有机酸类、萜类、挥发油等化学成分^[1]。1，3-二咖啡酰奎宁酸、3，5-二咖啡酰奎宁酸、3，4-二咖啡酰奎宁酸是本课题组从野菊花中分得的3个活性成分。药理研究表明咖啡酰奎宁酸类成分具有较好的抗炎、抗氧化、抗菌等作用^[2]，与野菊花的药理活性相一致。目前，已有报道对野菊花药材及其提取物中的单一或多种成分进行定量分析^[3-5]，采用HPLC同时测定野菊花中 8 种黄酮类和有机酸类成分（绿原酸、咖啡酸、1，3-二咖啡酰奎宁酸、3，5-二咖啡酰奎宁酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、3，4-二咖啡酰奎宁酸、蒙花苷及木犀草素）尚属首次。本研究对不同产地野菊花药材中8种成分进行含量分析，为提升野菊花药材的质量控制方法提供了实验依据。
　　1 材料
　　Shimadzu LC-20A高效液相色谱仪（日本Shimadzu公司）；BP211D型电子天平（1/10万，德国Sartarius公司）；Milli-Q超纯水机（美国 Millipore公司）；KQ-500E型医用数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；8453型紫外-可见分光光度计（美国Agilent公司）；中药粉碎机（瑞安市永历制药机械有限公司）。
　　对照品绿原酸（批号 110753-200413）、咖啡酸（批号 110885-200102）、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷（批号 111720-200604）、蒙花苷（批号 111528-200303）、木犀草素（批号 111520-200201）均购自中国食品药品检定研究院。对照品1，3-二咖啡酰奎宁酸、3，5-二咖啡酰奎宁酸、3，4-二咖啡酰奎宁酸由本单位天然药物化学室分离得到，经HPLC峰面积归一化法测定其纯度大于98.0%；甲醇（色谱纯，天津四友精细化学品有限公司）、乙腈（色谱纯，TEDIA，USA），醋酸（分析纯，国药集团化学试剂公司）、磷酸（分析纯，上海苏懿化学试剂有限公司）。
　　5批野菊花药材分别购于南京医药合肥大药房连锁有限公司（批号 20120806）、合肥国大药房（批号20110901）、合肥百姓缘大药房（批号 20120301）、合肥北京同仁堂合肥药店（批号 200007937）和合肥德康大药房（批号 20120622），其产地分别为安徽、湖北、湖南、河北和山西，经安徽医科大学药学院中药学教研室张群林副教授鉴定为Ch. indicum的干燥头状花序。
　　2 方法与结果
　　2.1 色谱条件 Shim pack VP-ODS色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相A为醇，B为0.3%磷酸水溶液。梯度洗脱，0～9 min，B 85%～80%；9～12 min，B 80%～70%；12～15 min，B 70%～65%；15～20 min，B 65%～60%；20～23min，B 60%～55%；23～29 min，B 55%～54%；29～32 min，B 54%～45%；32～37 min，B 45%～5%；37～45 min，B 5%。流速1.0 mL·min^-1，检测波长326 nm，进样量20 μL，柱温为35 ℃。在上述色谱条件下8种成分与其他共存峰得到很好的分离，分离度均大于1.5，理论塔板数均大于1万。见图1。
　　2.2 对照品溶液配制 分别精密称取绿原酸2.05 mg，咖啡酸1.22 mg，1，3-二咖啡酰奎宁酸1.56 mg，3，5-二咖啡酰奎宁酸1.52 mg，木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷2.24 mg，3，4-二咖啡酰奎宁酸2.07 mg，蒙花苷2.51 mg，木犀草素2.08 mg置5 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容，即得绿原酸0.410 g·L^-1，咖啡酸0.244 g·L^-1，1，3-二咖啡酰奎宁酸0.312 g·L^-1，3，5-二咖啡酰奎宁酸0.304 g·L^-1，木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷 0.448 g·L^-1， 3，4-二咖啡酰奎宁酸 0.414 g·L^-1， 蒙花苷 0.502 g·L^-1，木犀草素0.416 g·L^-1的对照品贮备液。分别精密量取2.5 mL绿原酸，0.25 mL咖啡酸，1.0 mL 1，3-二咖啡酰奎宁酸，2 mL 3，5-二咖啡酰奎宁酸，0.5 mL木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷，1.0 mL 3，4-二咖啡酰奎宁酸，2.0 mL蒙花苷和0. 5 mL木犀草素对照品溶液，置10 mL量瓶中，定容至刻度，即得到混合对照品溶液。

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