穿心莲药材贮藏期有效成分稳定性考察

　　摘要：目的 考察穿心莲药材贮藏期内穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量的动态变化。方法 采用高效液相色谱法，分别考察0、3、6、9、12、15、18个月贮藏期的穿心莲药材中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量。结果 随贮藏期的延长，穿心莲内酯呈递减趋势，而脱水穿心莲内酯有升高趋势。结论 穿心莲药材在0～12个月贮藏期内，穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯的含量变化相对明显，在12～18个月内，穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯的含量趋于稳定。
　　关键词：穿心莲 贮藏期 穿心莲内酯 脱水穿心莲内酯
　　穿心莲内酯（Andrographolide）和脱水穿心莲内酯（Dehydroandrographolide）是传统中药穿心莲的主要活性成分，二者因化学结构相近，在药理活性如解热、抗菌消炎、抗病毒等方面有很多相似之处。但二者又不完全相同，一方面[1]表现在体外药理活性，如抗肿瘤 （穿心莲内酯有抗肿瘤活性，脱水穿心莲内酯无抗肿瘤活性）、抗炎能力的强弱（脱水穿心莲内酯抗炎活性强，穿心莲内酯抗炎活性弱）；另一方面表现在生物利用度方面，如穿心莲内酯静注或灌胃给药， 在动物体内达峰快， 半衰期长，生物利用度高[2] ，而脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯单钾盐口服给药其生物利用度极低，测不到血药[3]。本文考察了穿心莲药材在贮藏过程中，其内部活性成分穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的动态含量变化，以期为临床用药和质量控制提供科学依据。
　　1仪器与试剂
　　Agilent 1200高效液相色谱仪；Sartorius 十万分之一电子天平；甲醇为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯；穿心莲内酯（110797-200307）及脱水穿心莲内酯对照品（110854-200306）由中国药品生物制品检定所提供；穿心莲药材来源于广东湛江遂溪穿心莲基地，经鉴定为为爵床科植物穿心莲Andrographis paniculata （Burm.f_）Nees。
　　2方法与结果
　　2.1 色谱条件 色谱柱：Diamsonsil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm， 5μm），甲醇一水（60：40）为流动相，流速1.0 mL/min，柱温25℃；检测波长：225.8nm（用于检测穿心莲内酯），254.8 nm （用于检测脱水穿心莲内酯） ；进样量10μl；理论塔板数按穿心莲内酯计算应不低于3000。穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的保留时间分别为5.8min和14.5 min，并且与其他组分分离良好。对照品和样品的高效液相色谱图见图1。
　　2.2 线性关系考察 精密称取穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯对照品适量，加甲醇溶解并定容至25ml，分别制备成浓度为1.02mg/ml和0.98 mg/ml的对照品储备液。分别精密吸取上述对照品储备液各50、100、200、400、800、1600μl加甲醇定容至10ml，得穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯对照品的系列标准液。依选定的色谱条件，分别吸取10μl进样测定，以峰面积（A）对进样量（X）进行线性回归，回归方程分别为：穿心莲内酯，A=1377.67 X一8.1167，r=0.9999，线性范围为0.051μg～1.632μg；脱水穿心莲内酯，A=598.67 X+2.079，r=0.9999，線性范围为0.049μg～1.568μg。
　　2.3 对照品的制备 分别精密吸取上述对照品储备液5ml，置50ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，得穿心莲内酯对照品0.102mg/ml，脱水穿心莲内酯对照品0.098mg/ml，备用。
　　2.4 样品的制备 参考2010版药典[4]方法，取穿心莲药材粉末（过四号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入40%甲醇25ml，称定重量，浸泡1h，超声处理（25W，频率33kHz）30min，放冷，再称定重量，用40%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10ml，置中性氧化铝柱（200～300目，5g，内径为1.5cm）上，用甲醇15ml洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
　　2.5 精密度试验 精密吸取上述对照品溶液10μl，重复进样6次，穿心莲内酯的RSD=0.85% ，脱水穿心莲内酯的RSD=0.93% 。
　　2.6 稳定性试验 精密吸取样品溶液10μl，分别于0，2，4，8，12，24h进行测定，穿心莲内酯的RSD=1.08% ，脱水穿心莲内酯的RSD=0.76% 。结果表明样品溶液放置24h内稳定。
　　2.7 重复性试验 取同批次穿心莲药材样品6份，按2.3项下操作，进样10 μl，测定峰面积，结果穿心莲内酯的RSD=2.89% ，脱水穿心莲内酯的RSD=2.57% 。
　　2.8 回收率试验 精密称取6份同一已知穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量的穿心莲药材0.25g，分别准确加入穿心莲内酯对照品3mg和脱水穿心莲内酯对照品1mg，余同2.3项下操作，进样测定峰面积，见表1，2。
　　2.9 样品含量测定 考察穿心莲在不同贮藏期的性状（包括色泽、气味、霉变、虫蛀等），未见异常。取不同贮藏期的穿心莲药材0.5g，按2.3项下操作，取10μl注入高效液相色谱仪。以外标一点法计算穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量（对照品同2.2项下，进样10μl），见表3。
　　3讨论
　　通过对不同贮藏期穿心莲药材中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量的测定，结果表明：穿心莲药材在贮藏过程中，穿心莲内酯含量逐渐减少，而脱水穿心莲内酯含量逐渐增加。且0～12个月内，穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯的含量变化相对明显；而12～18个月内，穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯的含量趋于稳定。
　　参考文献：
　　[1]曾超.穿心莲而萜内酯类化合物的合成与活性研究[D].河南：河南大学，2007：39-42.
　　[2]汪宝琪，庞志功，汪丛莹，等.间接化学发光法监测家兔血中穿心莲内酯的血药浓度[J].化学通报，1994，7：50-52.
　　[3]张志勇，廖工铁，王炳南等.脱水穿新莲内酯琥珀酸半酯单钾盐在家兔俸内的药代动力学研究[J].华西药学杂志，1991，6（3）：129.
　　[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010.
　　编辑/王海静

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