RP—HPLC法测定迷迭香药材中鼠尾草酸

　　摘 要：为建立高效液相色谱法测定迷迭香中鼠尾草酸含量的方法，以乙腈-0.1%磷酸水（60∶40）为流动相，检测波长为230 nm；柱温30℃，等度洗脱，流速为1.0 mL/min。结果显示，鼠尾草酸在0.277 2～1.016 4 mg/mL范围具有良好的线性关系（R2=0.999 92），回收率为97.56%。该方法快速、灵敏、准确，目标峰分离度良好，可为迷迭香药材以及提取物的质量控制提供依据。
　　关键词：高效液相色谱；迷迭香；鼠尾草酸
　　中图分类号：R284 文献标识码：A 文章编号：1006-060X（2016）10-0087-02
　　Abstract：To establish a HPLC method for the determination of carnosic acid in Rosemarinus officimalis L.， the anaiysis was carried out on Pheromenex Ecosil C18 column （200 mm ×4.6 mm，5 μm）， the mobile phase was composed of actonitrile and 0.1% phosphoric acid aqucous （60∶40， v/v）.The detection wavelength was 210 nm， with flow rate 1.0 mL/min at column temperature of 30 ℃.The standard curve of linear relationship was of 0.277 2-1.016 4 mg/mL and R2=0.999 92， average recovery was 97.56%. The method was accurate， sensitive， simple and reliable for the determination of carnosic acid in Rosemarinus oficinalis L.， suitable for the quality evaluation of Rosemarinus officinalis L.
　　Key words： HPLC； Rosemarinus officinalis L.； carnosic acid
　　迷迭香（Rosmarinus officinalis L.），别名艾菊，系唇形科迷迭香（Rosmarinus）属植物[1]，味辛、性温，原产于欧洲、北非以及地中海等地区，在中国云南、贵州和新疆等地有广泛种植[2-3]。现代研究表明，鼠尾草酸（Carnosic acid，简称CA）是迷迭香中抗氧化能力最强的活性成分[4-5]，含量一般在2.2%～3.1%[4-5]，作为一种安全无毒副作用的高效纯天然抗氧化剂，广泛应用于化妆品、各种植物油脂、肉制品、调味品、油炸食品、烘培食品等领域[6-7]，具有极大的市场需求和潜力，预计到2020年，迷迭香提取物市场需求将突破1万t。因此，建立高效、稳定、可靠的迷迭香鼠尾草酸检测方法，从资源、产品等方面进行严格的质量控制，对保障迷迭香深度开发具有重要意义。目前国内外对迷迭香中鼠尾草酸的含量测定，主要有高效液相色谱、紫外分光光度法、气相色谱、高效液相色谱-质谱联用等方法[8-11]，其中高效液相色谱法主要采用梯度洗脱法，但由于鼠尾草酸的最大紫外吸收波长位于230 nm左右，接近常规流动相的紫外截止波长，而常规液相色谱仪在梯度洗脱中又无法扣除流动相的本底吸收，容易造成基线漂移，并导致检测结果的可靠性和稳定性受到一定的影响，对高效液相色谱仪的选择要求也较高，一定程度上制约了这些方法的广普应用。试验以乙腈-0.1%磷酸水为流动相，建立迷迭香中鼠尾草酸的HPLC等度洗脱方法，有效地解决了上述问题，且检测结果稳定、可靠、高效，具有较好的广普性，为迷迭香中鼠尾草酸的开发利用提供了有力的理论依据。
　　1 材料与方法
　　1.1 仪器与设备
　　高效液相色谱仪（紫外检测器），日本岛津；色谱柱C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；超声波清洗仪，昆山市超声仪器有限公司（KQ3200B）；电子天平（METTLER AE240）。
　　1.2 药材与试剂
　　迷迭香药材由湖南三福生物科技有限公司提供，鼠尾草酸标准品购于美国Sigma-Aldrich公司。乙腈为色谱纯，购于美国Spectrum公司；其余试剂均为分析纯，广州国药集团。
　　1.3 色谱条件
　　流动相：乙腈-0.1%磷酸水（60∶40，v/v）；检测波长：230 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；进样量：20 μL。
　　1.4 供试品溶液的制备
　　迷迭香叶片除沙石等机械杂质后进行切断处理（约1 cm），自然阴干后粉碎，并过20目药筛。精密称取迷迭香粉末21.8 mg，置50 mL容量瓶中，加无水乙醇40 mL，超声处理20 min，待冷却加无水乙醇定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）过滤，备用。
　　1.5 对照品溶液的制备
　　精密称定鼠尾草酸对照品10.05 mg，置于10 mL棕色容量瓶中，加少量的无水乙醇超声溶解，待冷却后定容，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）过滤，备用。
　　2 结果与分析
　　2.1 色谱条件的优化
　　精密量取适量标准溶液流动相溶解后，在190～500 nm进行全波长紫外扫描。结果表明，标准溶液的鼠尾草酸在230、280和331 nm各有1个吸收峰（图1）。其中230 nm是其最大吸收波长，灵敏度高，重现性好；同时在230 nm处样品谱图中杂质干扰较少，因此选用230 nm作为检测波长。鼠尾草酸在17 min左右出峰，峰形良好，灵敏度高，重现性好，样品中鼠尾草酸的峰形及与其他杂峰的分离度最为理想（图1）。

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