茵陈药材质量控制方法研究

　　摘 要 长期以来中药存在着以劣充优，互混、互代现象，质量差异很大，而药材的优劣是保证复方中药质量的前提。为解决中药材的质量可控性问题，在完善药材质量标准时，应选择合适的指标成分对其进行质量控制。本文通过对指标成分6，7-二甲氧基香豆素和阿魏酸的含量作为指标，考察样品制备方法，完善药材的质量标准，为参芪肝康胶囊的质量稳定奠定基础。
　　关键词 茵陈；药材质量；方法研究；讨论
　　1 试验材料1.1 仪器
　　高效液相色谱仪（LC-10ATvp-UV），色谱数据处理系统（ANASTAR），电子分析天平（Sartorius），AB135-S电子分析天平，数显恒温水浴锅（HH-2），超声波清洗仪（DL-180） ，循环水式多用真空泵（SHB-Ⅲ（A）），真空干燥箱（DZF-1），石英亚沸高纯水蒸馏器（SYZ-550）。
　　1.2 试剂
　　甲醇（色谱纯），冰醋酸（分析纯），甲醇（分析纯），乙醇（分析纯），乙醚（分析纯），盐酸（分析纯）水（二次蒸馏水）。
　　1.3 药品
　　6，7-二甲氧基香豆素（HPLC纯度99.6%） 实验室自制，阿魏酸对照品 ，中国药品生物制品检定所，茵陈药材
　　采于沈阳北陵，党参药材 沈阳天益堂大药房药材均经沈阳药科大学生药鉴定教研室孙启时教授鉴定为正品。
　　2 茵陈药材中6，7-二甲氧基香豆素的含量测定
　　2.1 色谱条件
　　色谱柱：Diamonsil C18 （200 mm × 4.6 mm，5 μm，迪玛公司）；流动相：甲醇-0.5%冰醋酸溶液 （44：56，v/v）；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：240 nm；柱温：室温；进样量：10 mL。
　　2.2 色谱系统适用性试验
　　在上述色谱条件下，样品中6，7-二甲氧基香豆素与其它组分达到了基线分离。理论塔板数按6，7-二甲氧基香豆素计算不低于3000。
　　2.3 溶液的制备
　　对照品溶液的制备 精密称取6，7-二甲氧基香豆素对照品适量，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成浓度为0.745 mg·mL-1的对照品储备液。精密量取上述对照品储备液1.0 mL，置10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液 （每1 mL中含6，7-二甲氧基香豆素74.5 mg）。
　　供试品溶液的制备 称取干燥的药材粉末 （过60目筛） 约0.1 g，精密称定，置50 mL锥形瓶中，精密加入乙醇25 mL，超声处理30 min，放冷至室温，摇匀，滤过，减压回收溶剂，残渣用甲醇溶解并转移至10 mL量瓶中，稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜（0.45 mm）滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
　　2.4 測定法
　　精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10 mL，注入液相色谱仪，记录色谱图，测量峰面积，按外标法以峰面积计算，即得。
　　2.5 方法学考察
　　标准曲线的绘制 取6，7-二甲氧基香豆素的储备液，精密吸取0.2、0.4、0.8、1.2、1.6和2.0 mL，分别置10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，取上述溶液依次进样，测量峰面积。分别以峰面积 （y） 对各自浓度 （x） 进行线性回归，回归方程为：y = 1.206 × 104x + 7.625 × 104，r = 0.9992，线性范围为14.9～149 μg·mL-1。
　　色谱系统精密度试验 取“供试品溶液的制备”项下的同一供试品溶液，连续进样6次，每次10 mL，记录色谱峰面积，6，7-二甲氧基香豆素峰面积的RSD为1.5 %。
　　方法重复性试验 取同一编号的茵陈药材6份，照“供试品溶液制备”项下方法操作，制备供试品溶液。依次进样，记录色谱峰面积，6，7-二甲氧基香豆素平均含量为4.00 mg·g-1，RSD为2.1 %。
　　溶液稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于0、2、4、8、12和24 h进样，测定峰面积，计算溶液中6，7-二甲氧基香豆素的含量。结果表明，6，7-二甲氧基香豆素在室温放置24 h稳定，RSD为2.0 %。
　　方法回收率试验 精密称取9份已知含量的同一编号的茵陈药材各0.05 g，加入6，7-二甲氧基香豆素对照品储备液 0.12、0.24和0.36 mL，照“供试品溶液的制备”项下方法操作，制备供试品溶液并进样分析。测得6，7-二甲氧基香豆素的方法回收率为96.4%，RSD为1.8 %，
　　2.6 样品测定
　　取3批样品，照“供试品溶液的制备”项下的方法制备供试品溶液，精密量取供试品溶液10 mL注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积按外标法计算相应茵陈药材中6，7-二甲氧基香豆素的含量。
　　2.7 讨论
　　《中国药典》2015年版一部中茵陈药材的质量标准中没有含量测定项[1]。传统中药茵陈为参芪肝康胶囊方中主药，具有清热利湿、利胆退黄之功效，临床上广泛用于治疗黄疸、肝炎等疾病[2]。茵陈在生长过程的幼苗阶段（绵茵陈）与果实成熟期（茵陈蒿）中有效成分大不相同，其中具有保肝利胆功效的主要成分香豆素类，主要存在于茵陈蒿中[3]。所以本处方以茵陈蒿入药，与本处方的药效相符。经研究证实，其口服后入血的主要成分为6，7-二甲氧基香豆素，且该成分具有利胆、保肝等生物活性，为茵陈的药效物质基础之一[4，5]，且在茵陈药材中含量较高，可作为药材的质量控制指标成分。
　　本文考察了超声提取法、回流提取法，并同时考察了95 %、75 % 和70 % 的乙醇溶液和95 %、75 % 的甲醇作为提取溶剂的提取率。结果证明，95 % 乙醇溶液超声30 min的方法提取率高，干扰少，样品处理简便，快捷。
　　参考文献：
　　[1]中华人民共和国卫生部药典委员会主编.中华人民共和国药典（2005年版）北京：人民卫生出版社，2005
　　[2]谢韬，梁敬钰，刘净.茵陈化学成分和药理作用研究进展.海峡药学.2004，16（1）：8～13

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