不同炮制品瑞香狼毒药材急性毒性试验研究

　　摘要 [目的]通过对瑞香狼毒药材急性毒性试验的研究，对瑞香狼毒生品、醋制品和姜矾制品的急性毒性进行比较，为瑞香狼毒炮制工艺的规范化和临床用药安全提供试验依据。[方法]按照经典急性毒性试验方法，各组试验连续观察10d，计算各组动物死亡数，采用Bliss法计算小鼠的LD50及其95%的可信限。[结果]瑞香狼毒生品LD50=547.56mg/kg，其95%的可信限为476.86～625.58mg/kg；醋制品LD50=689.23mg/kg，其95%的可信限为546.96～817.22mg/kg；姜矾制品LD50=976.89mg/kg，其95%的可信限为826.95～1134.50mg/kg。[结论]瑞香狼毒生品经炮制后毒性有所降低，毒性由小到大的排列顺序为姜矾制品<醋制品<生品。
　　关键词 瑞香狼毒；炮制品；急性毒性试验
　　中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2015）09-072-01
　　瑞香狼毒其主要的活性成分有黄酮类、二萜类、香豆素类以及木脂素类化合物[1]。文献资料报道瑞香狼毒中黄酮类和二萜原酸酯类具有较强的体内和体外抗肿瘤作用，同时也是瑞香狼毒的主要有毒成分[2]。所以，采用适当的炮制方法可以避免有效成分的损失，降低毒性。笔者通过对瑞香狼毒药材急性毒性试验的研究，计算急性毒性参数，对生品、醋制品和姜矾制品的毒性进行比较，为瑞香狼毒炮制工艺的规范化和临床用药安全提供试验依据。
　　1 材料与方法
　　1.1 试验动物
　　清洁级昆明种小鼠，体重18～22g，雌雄各半，由大连医科大学实验动物中心提供，使用许可证号SCXK（辽）2013-0002。
　　1.2 试验药品
　　瑞香狼毒药材购自于内蒙古，经辽宁中医药大学王冰教授鉴定为正品药材。瑞香狼毒生品、醋制品和姜矾制品的样品液均自制。
　　1.3 样品液的制备
　　精密称取瑞香狼毒生品、醋制品和姜矾制品的粉末各（过60目筛）50g，分别加入95%乙醇500ml，加热回流1h，过滤，滤液浓缩，蒸干，得干膏，用30%的1，2丙二醇为溶剂，超声溶解备用。
　　1.4 主要仪器与设备
　　电子分析天平（D432810821）；腹腔注射器等。
　　1.5 剂量与分组
　　通过预试验所得到的全死剂量和全不死剂量，设定给药剂量，组距=0.8。同时设立溶媒对照组，即30%的1，2丙二醇组，以观察溶剂是否对小鼠产生影响。给药剂量分组情况如表1所示。
　　1.6 急性毒性测定 生品组、醋制品组和姜矾制品组中清洁级小鼠各50只，体重18～22g，雌雄各半，按体重随机分为5组，每组10只。试验前禁食（不禁水）12h，采用腹腔注射法，注射剂量0.2ml/10g。各组连续观察10d，计算各组动物死亡数，采用Bliss法计算小鼠的LD50及其95%的可信限。
　　2 结果与分析
　　2.1 瑞香狼毒生品组急性毒性试验
　　由表2可见，按瑞香狼毒生品组剂量等级1组给药后，小鼠明显出现活动困难、呼吸急促，死亡时间短暂，最短时间约3min，其余小鼠30min内全部死亡；剂量等级5组给药，小鼠死亡率明显下降，仅有1只小鼠死亡；其他等级给药，小鼠明显活动困难，呼吸急促、步态不稳。死亡率按照用药剂量的降低有所升高。给药24h后，未亡小鼠饮食饮水逐渐恢复正常，存活小鼠产生的毒性反应随时间慢慢恢复。空白对照组和溶媒对照组未见有小鼠异常反应和死亡。
　　2.2 瑞香狼毒醋制品组急性毒性试验
　　表3显示，按瑞香狼毒醋制品组剂量等级1组给药后，小鼠同样出现活动困难、呼吸急促，但死亡时间延长，在12h内陆续死亡，仅有1只小鼠存活；剂量等级5组给药，小鼠死亡率下降，仅有2只小鼠死亡；其他等级给药，小鼠肌肉痉挛明显，静伏少动，死亡时间延长至48h。空白对照组和溶媒对照组未见有小鼠异常反应和死亡。
　　2.3 瑞香狼毒姜矾制品组急性毒性试验
　　按瑞香狼毒姜矾制品组剂量等级1组给药后，小鼠死亡时间延长至48h内陆续死亡，1只小鼠存活；剂量等级5组给药，小鼠死亡率下降，仅有1只小鼠死亡；其他等级给药，死亡时间延长至60h。
　　空白对照组和溶媒对照组未见有小鼠异常反应和死亡（表4）。
　　2.4 LD50及其可信限
　　由表5可知，生品LD50=547.56mg/kg，其95%的可信限为476.86～625.58mg/kg；醋制品LD50=689.23mg/kg，其95%的可信限为546.96～817.22
　　mg/kg；姜矾制品LD50=976.89mg/kg，其95%的可信限为826.95～1134.50mg/kg。
　　表5 瑞香狼毒不同炮制品急性毒性试验LD50的测定结果
　　组别LD50mg/kgLD5095%可信限∥mg/kgLD50提高指数
　　瑞香狼毒生品547.56476.86～625.581.0000
　　瑞香狼毒醋制品689.23546.96～817.211.2587
　　瑞香狼毒姜矾制品976.89826.95～1134.501.7841
　　3 小结与讨论
　　试验结果表明瑞香狼毒经炮制后毒性有所降低，毒性由小到大的排列顺序为姜矾制品<醋制品<生品，说明瑞香狼毒经姜矾制后毒性降低的程度优于醋制，确实达到了降低毒性，提高用药安全性的作用。
　　现今文献报道中，对瑞香狼毒生品的药效药理、毒性试验报道的较多，而其醋制品和姜矾制品方面的文献报道较少。该试验将其生品和炮制品在急性毒性方面的不同进行研究，通过三者的LD50及LD50的可信限，比较三者毒性强弱顺序，对进一步了解炮制作用、阐明炮制机理具有重要意义。
　　参考文献
　　[1]王敏.瑞香狼毒总黄酮提取物的抗肿瘤作用[J].中国中药杂志，2005，30（8）：603-606.
　　[2]汤亚杰，徐小玲，李冬生，等.瑞香狼毒化学成分与抗肿瘤作用研究进展[J].中成药，2008，30（7）：21-23.

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