HPLC法同时测定阿咖片中2种有效成分的含量

　　【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-6851（2018）03--01
　　阿咖片作为解热镇痛药，主要是由阿司匹林和咖啡因组成的复方制剂。现行国家药品标准采用的是滴定法分别测定2种成分，操作繁琐，结果误差大。本法采用HPLC法同时测定阿司匹林和咖啡因含量，操作简便，结果精准。
　　1 仪器与试药
　　1.1 仪器 Waters e2695型高效液相色谱仪；2998PDAD型UV检测器；Empower色谱工作站；PH计；超声；天平
　　1.2 试药 仁和阿咖片（江西制药有限责任公司，批号：1411071 1401161 1502281）；阿司匹林对照品（批号：100113-201104，含量：100%，中检院）；咖啡因对照品（批号：171215-201010，含量：100%，中检院）；甲醇为色谱纯；甲酸为分析纯；纯化水
　　2 方法与结果
　　2.1 色谱条件 色谱柱：Hypersil Bos C18（4.6×200mm，5um）；柱温：30℃；流动相： 水（用甲酸调PH至2.6）-甲醇（70：30）；检测波长：275nm；流速：1.0ml/min；进样体积：20ul，在该条件下，阿咖片中两种成分的色谱图见图1
　　2.2 对照品溶液制备 精密称取阿司匹林和咖啡因对照品适量，用流动相溶解配制成含阿司匹林0.419mg/ml咖啡因0.0486mg/ml作为对照品储备液。
　　2.3 供试品溶液制备 取本品10片，称重并研细，精密称取粉末适量（约相当于阿司匹林50mg）置100ml容量瓶，加流动相适量，摇匀并超声15分钟，用流动相稀释至刻度，滤过，取续滤液5ml置于25ml容量瓶，用流动相稀释至刻度即得。
　　2.4 方法学考察
　　2.4.1 線性关系 精密吸取对照品储备液1ml，2.5ml，5ml，10ml，15ml分别置于20ml容量瓶并用流动相稀释至刻度，分别进样20ul测定，以浓度（mg/ml）为X轴，峰面积为Y轴，计算得阿司匹林和咖啡因线性回归方程分别为：Y 阿司匹林=7×106X-8015.8，R=1，Y咖啡因=5×107X-19819，R=0.9997。结果表明阿司匹林和咖啡因的线性范围分别是1.15-314.25ug/ml与0.396-36.45ug/ml。
　　2.4.2 精密度实验 精密吸取阿司匹林和咖啡因混合对照品（浓度分别为0.1048mg/ml 0.0122mg/ml）20ul，重复进样6针，测得阿司匹林和咖啡因峰面积的RSD分别为0.40% 0.45%。
　　2.4.3 稳定性试验 取同一份混合对照品溶液，在0h 2h 4h 6h 8h依次进样测定，阿司匹林和咖啡因的RSD分别为1.6% 0.7%，结果表明8h内阿司匹林和咖啡因的稳定性良好。
　　2.4.4 重复性试验 精密吸取同一样品（批号：1411071），照2.3项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样20ul，测定并计算阿司匹林和咖啡因的含量，RSD（n=6）分别为0.9% 1.0%。
　　2.4.5 耐用性试验 通过改变柱温在25℃ 30℃ 35℃的条件下依次进样，测得阿司匹林和咖啡因峰面积的RSD分别为1.6% ，结果表明柱温在25-35℃范围内对结果的影响很小。
　　2.4.6 加样回收试验 精密称取已知含量的样品适量（约相当于阿司匹林50mg），用流动相溶解，超声15分钟后定容至100ml，取续滤液5ml定容至50ml作为本底，再分别取续滤液5ml，按其含量的80% 100% 120%各3份加入对照品储备液混匀并定容至50ml即得。测得阿司匹林的平均回收率为98.1%（RSD=0.8%）和咖啡因的平均回收率为101.2%（RSD=0.2%）
　　2.5 样品含量测定 按照本法条件，以外标法分别测定3批样品，计算阿司匹林和咖啡因的含量，结果见表2：
　　3 讨论
　　3.1 酸碱度 阿司匹林易水解为游离的水杨酸，因此只有合理的调节PH才能有效地抑制水解，防止拖尾。而在实验过程中，我们发现加入适量的甲酸，阿司匹林峰型良好，无拖尾现象，而酸性过强会损害色谱柱，酸性不够又没法很好的抑制阿司匹林水解，因此选择用甲酸调节PH至2.6，效果比较好。
　　3.2 检测波长的确定
　　取稀释的对照品储备液3份，分别进行紫外扫
　　描，结果显示阿司匹林和咖啡因在275nm处均有较大吸收，因此选择275nm作为检测波长。
　　3.3 流动相的选择
　　我们比较了甲醇-水，乙腈-水，甲醇-乙腈-水三种流动相系统，乙腈-水流动相系统中阿司匹林和咖啡因色谱峰的分离度达不到要求，甲醇-乙腈-水系统色谱峰分离度较好，但色谱柱柱压较高且容易基线漂移，因此，我们确定甲醇-水为本文的流动相体系。
　　3.4 本试验建立了HPLC同时测定阿咖片中阿司匹林和咖啡因的分析方法，方法简单、准确、重复性好，可用于阿咖片的含量测定。
　　参考文献
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