利用HPLC采用一测多评方法测定大黄药材中5种成分

　　【摘要】目的：采用高效液相色谱（HPLC）对用大黄素一种对照品检测大黄药材中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚五种成分的总量，以减少对照品的使用数目、节约资源。方法：采用HPLC技术进行分析，色谱柱：大连依利特Hypersil BDS C18柱（250×4.6mm，5?m）；检测波长为254nm。流动相： 甲醇-0.1%磷酸溶液（85：15），柱温25℃，检测波长为254nm，结果：用大黄素对照品测定五种成分的相对保留时间的重复性良好、仪器精密度RSD为2.5%。结论：本法简单、快捷，能够满足质量检测的需求。
　　【关键词】一测多评；HPLC；大黄
　　【中图分类号】R-0 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2015）04-0298-01
　　1 仪器与试剂
　　1.1 仪器 Agilent 1100 高效液相色谱仪（含在线真空脱气机，四元泵，手动进样器，柱温箱，检测器），Agilent化学工作站；岛津LC-10ADvp高效液相色谱仪，SPD-M10Avp二极管阵列检测器，岛津化学工作站。
　　1.2 试剂 甲醇为色谱纯（国药集团化学试剂有限公司），其它试剂均为分析纯。大黄素对照品（批号：110766-200416）、芦荟大黄素（批号：110795-200504）、大黄酸（批号：0757-200206）、大黄素（批号：110756-200110）、大黄酚（批号：110796-200716）、大黄素甲醚（批号：110758-200610）均购于中国药品生物制品检定所，大黄药材由安徽华佗国药股份有限公司提供。
　　2 方法与结果
　　2.1 色谱条件 色谱柱为大连依利特公司Hypersil BDS C18（250×4.6mm，5?m）；以甲醇-0.1%磷酸溶液（85：15）为流动相；检测波长为254nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于3000。
　　2.2 对照品、供试品溶液的制备
　　2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各80μg，大黄素甲醚40μg的溶液；分别精密量取上述对照品溶液各2ml，混匀，即得（每1ml中含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各16μg，含大黄素甲醚8μg） [1]。
　　2.2.2 供试品溶液的制备 取本品粉末（过四号筛）约0.15g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液5ml，置烧瓶中，挥去溶剂，加8%盐酸溶液10ml，超声处理2分钟，再加三氯甲烷10ml，加热回流1小时，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次10ml，合并三氯甲烷液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得[1]。
　　测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，以大黄素对照品的峰面积为对照，分别计算芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的含量，用待测成分色谱峰与大黄素色谱峰的相对保留时间确定。
　　2.3精密度试验 分别精密吸取大黄素对照品溶液，连续进样5次，每次10μl，按上述实验方法项下的色谱条件测定，结果每次峰面积的RSD为2.5%，表明本方法仪器精密度良好。
　　2.4 重复性试验 按供试品溶液的制备方法处理10批样品，采用不同高效液相色谱仪，按上述色谱条件分别测定，记录色谱图，以大黄素色谱峰，计算5种成分的相对保留时间的平均值为：芦荟大黄素0.52、大黄酸0.67、大黄素1.0、大黄酚1.38和大黄素甲醚2.01。结果每种成分相对保留时间都<4%，表明各共有峰的相对保留时间稳定，表明本方法重复性良好。
　　2.4 样品含量测定 采用不同高效液相色谱仪测定，按上述处理和计算方法与中国药典2010年版一部比较，计算5批大黄药材中五种成分的总量结果见下表2。
　　3 讨论
　　3.1采用一种对照品测定两种及两种以上成分的测定方法即一测多评（一标多测）。一测多评（一标多测）技术首次在中国药典2010年版一部“黄连”药材中采用，仅“黄连”药材含量测定项采用此方法[2]，即用盐酸小檗碱一种对照品测定盐酸小檗碱、表小檗碱、黄连碱和巴马汀四种成分的含量。
　　表2 5批大黄药材含量测定结果比较
　　Tab.1 5 batches of assay results compared medicinal rhubarb
　　结果批 号average
　　01010102020103010302
　　药典方法计算（%）1.811.721.831.501.671.71
　　本文方法计算（%）2.001.952.031.681.891.91
　　本文比药典方法高出（%）10.513.410.912.013.112.0
　　3.2 计算结果 以本文的方法与中国药典2010年版做了比较，结果使用本文方法比中国药典计算高出约12%，如果大黄药材采用本文方法计算，标准限度可提高为1.68%，基本与现在的中国药典方法的限度1.5%相当。
　　3.3 色谱条件、对照品和供试品溶液的制备 由于完全选用中国药典2010年版一部大黄药材（P22）项下含量测定中的色谱条件、对照品和供试品溶液的制备方法，所以没有再考察线性关系、样品溶液的稳定性、加样回收；主要考察了仪器的精密度、采用不同高效液相色谱仪的相对保留时间的重复性、本方法的含量计算结果的重复性。
　　参考文献：
　　1 ChP（中国药典）.2010.Vol（一部）：22
　　2 ChP（中国药典）.2010.Vol（一部）：285

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