不同产地广东紫珠药材苯乙醇苷类成分含量与抗氧化能力的相关性

　　摘要： 采用超声提取广东紫珠中的连翘酯苷B和金石蚕苷，用HPLC法测定其含量，并考察其与抗氧化活性的相关性。色谱柱为sunfire C18 4.6 mm×250 mm色谱柱；流动相为乙腈：水（含0.1%甲酸）的溶液（18 ∶ 82）；检测波长为332 nm。抗氧化活性采用DPPH法和铁氰化钾还原法测定。测定结果，广东紫珠药材中连翘酯苷B和金石蚕苷含量最高的分别来自江西武宁和萍乡芦溪，相关性分析结果表明，连翘酯苷B和金石蚕苷含量与广东紫珠抗氧化能力均有一定的正相关性。表明不同产地广东紫珠药材中连翘酯苷B和金石蚕苷的含量有显著差异；苯乙醇苷类成分为广东紫珠中主要的抗氧化成分，与自由基清除率和总还原力呈正相关。
　　关键词： 广东紫珠；连翘酯苷B；金石蚕苷；抗氧化活性
　　中图分类号： R284.1 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2016）03-0273-03
　　广东紫珠（Callicarpa kwangtungensis Chun.）为马鞭草科紫珠属多年生落叶小灌木，茎枝以及叶入药，收录于2010版国家药典，具有收敛止血、清热解毒等作用[1]。广东紫珠以地上部位入药，其中的苯乙醇苷类成分被认为是其主要化学成分，目前，研究者从中分离到10余种该类化合物[2-3]。相关研究表明，植物中的苯乙醇苷类成分具有较好的抗氧化活性[4]。相关学者对广东紫珠的抗氧化作用进行了初步研究。结果表明，广东紫珠的各极性部位均有不同程度清除 DPPH·、OH·的能力[5]。目前，对广东紫珠药材的抗氧化活性研究还较少，苯乙醇苷类具体成分与抗氧化能力之间的相关性研究还未见报道。因此，本试验首先利用HPLC法测定了12个不同产地的广东紫珠中连翘酯苷B和金石蚕苷2种苯乙醇苷类成分，同时测定了12个不同产地广东紫珠的DPPH清除率和总还原力，并对二者数据进行了相关性分析，对广东紫珠药材的抗氧化作用进行研究，以期为更好地综合开发利用广东紫珠资源提供参考。
　　1 材料与方法
　　1.1 仪器
　　Waters 2695高效液相色谱仪，紫外检测器2489，美国Waters公司生产；UV-752紫外分光光度计，上海光谱仪器有限公司生产；CP214型分析天平，奥豪斯仪器有限公司生产；超声清洗器，洁康超声波有限公司生产；超声波功率 120 W，频率40 kHz；RE-52旋转蒸发器，上海亚荣公司生产。
　　1.2 药品
　　2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚（BHT）和1，1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基（DPPH）购于西格玛公司上海办事处；连翘酯苷B和金石蚕苷对照品购自南京泽朗医药有限公司，纯度经检验大于98%；乙腈为色谱纯铁氰化钾、三氯乙酸、三氯化铁、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、甲醇、甲酸等均为分析纯；水为娃哈哈纯净水。
　　1.3 材料
　　广东紫珠药材采自12个不同产地，药材来源见表1，经江西省林业科学院鉴定为马鞭草科紫珠属植物广东紫珠（Callicarpa kwangtungensis Chun.）的地上部分。
　　1.4 方法
　　1.4.1 样品溶液的制备
　　1.4.1.1 对照品溶液的制备 精确称取连翘酯苷和金石蚕苷对照品各5.00 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，精确量取各标准品溶液1 mL，混匀，制得混合标准品溶液，进样前用微孔滤膜过滤，去杂质，备用。
　　1.4.1.2 样品溶液的制备 取干燥广东紫珠药材，粉碎，过50目筛，精确称定2 g，置具塞锥形瓶中，加入50%乙醇20 mL，36 ℃超声提取30 min，提取2次，静置，过滤，合并2次滤液，并浓缩定容至20 mL，0.45 μm微孔滤膜过滤，备用。
　　1.4.2 广东紫珠中苯乙醇苷成分含量测定 色谱条件：色谱柱为sunfire C18 4.6 mm×250 mm色谱柱；流动相为乙腈 ∶ 水（含0.1%甲酸）为18 ∶ 82；检测波长为332 nm；流速为 1 mL/min；柱温为25 ℃；进样量10 μL。
　　1.4.3 抗氧化活性测定方法
　　1.4.3.1 自由基清除活性测定方法（DPPH法）[6] DPPH用无水乙醇配制成0.039 4 mg/mL的溶液，置于棕色瓶中备用。取各广东紫珠药材提取液（按照“1.4.1.2”节的方法制备，并稀释至浓度为0.1 mg/mL）3 mL，加入3 mL DPPH 标准液，于517 nm波长处测得吸光值Di；以乙醇代替样品溶液做空白试验，在 517 nm处测吸光值D0；另取3 mL溶液加3 mL 乙醇测得吸光度为Dj。根据以上数据算出清除率：
　　清除率=[1-（Di-Dj）/D0]×100%。
　　1.4.3.2 总还原力测定法（铁氰化钾法）[7] 在2.5 mL pH值6.6磷酸缓冲溶液中加入1 mL广东紫珠样品溶液（按照“1.4.1.2”节的方法制备，并稀释至浓度为2.5 mg/mL）、2.5 mL 1% 铁氰化钾，混合物在 50 ℃恒温条件下，加热 20 min。急速冷却，加2.5 mL 10%三氯乙酸，混匀后以3 000 r/min 离心10 min。取上层清液 2.5 mL，加2.5 mL蒸馏水再加0.5 mL 0.1% FeCl3，混合均匀，静置10 min 后，在700 nm处测定吸光度。
　　2 结果与分析
　　2.1 广东紫珠中连翘酯苷B和金石蚕苷含量测定方法学考察
　　2.1.1 标准曲线的测定 分别精确称取连翘酯苷B、金石蚕苷各5 mg，置于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得对照品溶液。分别精确量取1 mL，混合，得混合对照品储备液。注入高效液相色谱仪，进样体积分别为1、4、8、12、16、20 μL，测定连翘酯苷B、金石蚕苷的峰面积，分别以连翘酯苷B、金石蚕苷的量（μg）为横坐标（x），峰面积为纵坐标（y），绘制标准曲线，计算回归方程，得到连翘酯苷B的回归方程为：y=886 531x+284 290，r=0.995 1；金石蚕苷的回归方程为：y=982 413x+371 749，r=0.9995。结果表明，连翘酯苷B和金石蚕苷在0.25～5.0 μg 范围内线性关系均良好。标准品及样品HPLC图见图1、图2。

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