多基原秦皮药材中秦皮甲素和秦皮苷的纯化技术探讨

　　摘要：目的：对于多基原秦皮药材中秦皮甲素和秦皮苷的纯化技术进行探究。方法：采取D101C大孔树脂作为分离以及纯化载体，指标为秦皮甲素和秦皮苷的含量，构建起有关的工艺参数并进行评价。结果：依据构建起的工艺，将三种基原的秦皮药材为材料，以明确好的工艺展开相应处理，提取物中秦皮甲素和秦皮苷的转移率超过80%，同时质量分数提升五倍。结论：在本研究中的工艺，能够满足多种基原的秦皮中秦皮甲素以及秦皮苷的纯化。
　　关键词：多基原秦皮药材；秦皮甲素；秦皮苷；纯化技术
　　当前，在治疗眼疾的滴眼液中，秦皮苷等秦皮提取物具有较为广泛的应用，但是对于秦皮中秦皮甲素以及秦皮苷纯化工艺还缺少深入的研究。鉴于此，本文对于多基原秦皮药材中秦皮甲素和秦皮苷的纯化技术实施详尽的观察及探究。报告内容如以下所展示。
　　1一般资料
　　本研究中应欧勇到的仪器设备为Waters 515高效液相色谱仪，N2000色谱工作站，Sartorius BP211D电子天平，以及SENCO RE-205B旋转蒸发器；本研究应用到的试药为：三种基原的秦皮药材，经过严格鉴定结果为木犀科尖叶白蜡树Fraxinus szaboana Lingelsh、白蜡树Fraxinus chinensis Roxb、宿柱白蜡树Fraxinus stylosa Lingelsh；LSA-21、LX-38、LXA-8以及D101、D101C医药级大孔树脂；秦皮甲素对照品，质量分数在98%及以上；秦皮苷，质量分数在98%及以上；HPLC用甲醇和乙腈为色谱纯；另外的其他试剂均是分析纯。
　　2方法及结果
　　2.1制备上柱液以及测定含量
　　取秦皮粉碎，将粗粉放入进药材10倍量体积分数为80%的甲醇溶液，进行回流提取90min，实施三次的提取，并且真空回收滤去药渣甲醇溶液后获得秦皮浸膏，进行加入水溶解，到原药材质量的两倍。采取等量氯仿萃取两次以及分去氯仿，水相于水浴中真空浓缩到不具有显著溶剂流出结束，加水进行调节到原来药材的两倍，作为上柱液[1]。依据《中国药典》秦皮项下含量测定方法，分别测定秦皮甲素以及秦皮苷含量为6.0mg·mL-1以及4.4mg·mL-1。
　　2.2大孔树脂预处理以及筛选树脂
　　采取乙醇浸泡新树脂时间为12h，同时以乙醇洗至流出液加蒸馏水无乳白色浑浊和异味，并应用蒸馏水洗到无醇味状态备用；取五种已经预处理的树脂，规格为10mL放在具塞三角瓶内，同时加进秦皮上柱液各自20mL，每分钟进行1次振摇，在2小时以后进行吸取上层溶液。除去水相以后把树脂在具塞三角瓶分别移动，同时加入进体积分数50%乙醇溶液40mL，进行震荡解吸，在3小时以后对于解吸液内的秦皮甲素和秦皮苷质量浓度测定，计算得出树脂的比吸附值、解吸率[2]。结果显示，秦皮甲素和秦皮苷在大孔树脂上的吸附值随树脂的极性增加存在减小现象，而且D101C型树脂具有个大的比吸附值以及解吸率，可作为目标成分分离纯化的载体。
　　2.3 D101C树脂的动态吸附曲线和洗脱流速的考察
　　取预处理好并保存在水溶液中的D101C型大孔樹脂100mL，将上样液按照2BV·h-1流速实施连续通过树脂，并收集流出液作为供试品溶液，测定质量浓度，结果显示最佳的上样量是2BV，即1.0g·mL-1树脂；流速对洗脱效果，可产生显著影响，经全面考虑目标成分洗脱效果，选取洗脱流速为2BV·h-1。
　　2.4选取洗脱溶剂和考察洗脱曲线
　　吸取秦皮上柱液20mL经四根装有D101C 10mL的树脂柱，以水淋洗至流出液澄清，再以40mL体积分数为不同乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液并测定秦皮甲素以及秦皮苷含量。结果显示，采取体积分数30%乙醇为洗脱剂最适宜。考察洗脱曲线，结果显示积分数30%乙醇洗脱溶剂用量为树脂体积的四倍。
　　2.5工艺适用性验证
　　三种来源的秦皮药材中秦皮甲素和秦皮苷均具有超过80%转移率，同时纯化处理后两者质量分数均超过五倍，所以显示上述纯化方法适合不同秦皮中相关成分的纯化。此外，秦皮中秦皮甲素和秦皮苷的最佳纯化工艺条件为上柱液质量浓度在0.5g·mL-1生药，而且上样量在2BV树脂，以水实施洗至流出液澄清再以4BV体积分数30%乙醇洗脱，直到脱液有醇味开始获取4BV洗脱液，通过洗脱液浓缩以及干燥，获得秦皮甲素和秦皮苷提取物。
　　3讨论
　　在治疗眼疾的滴眼液中，秦皮苷等秦皮提取物具有较为广泛的应用，但是当前对于秦皮中秦皮甲素以及秦皮苷纯化工艺还缺少深入的研究。在秦皮提取液中，存在酚性化合物和鞣质等物质。如果不将上柱液处理并直接上柱，就会对于树脂的纯化能力产生一定影响，会引发工艺的重复性明显变差，而采取氯仿萃取处理上柱液的方式，能够将以上问题进行良好处理[3-4]。本研究遵循有机溶剂萃取和盐析或酸碱处理等举措，进行制备秦皮甲素和秦皮苷的提取物。结果显示，上述分离纯化方法，存在对秦皮基原植物的种类依赖性问题，仅少数种类秦皮药材适合上述方法。而实施成本较低以及可多次重复应用的D101C型大孔树脂为分离纯化载体的举措，能够作为广泛适用性的分离纯化工艺，在生产纯度较高的秦皮甲素和秦皮苷等提取物中具有良好的应用效果。
　　结语：
　　综上所述，在本研究中的工艺，能够满足多种基原的秦皮中秦皮甲素以及秦皮苷的纯化。秦皮中秦皮甲素和秦皮苷的最佳纯化工艺条件为上柱液质量浓度在0.5g·mL-1生药，而且上样量在2BV树脂，以水实施洗至流出液澄清再以4BV体积分数30%乙醇洗脱，直到脱液有醇味开始获取4BV洗脱液，通过洗脱液浓缩以及干燥，获得秦皮甲素和秦皮苷提取物。
　　参考文献：
　　[1]马宏伟.复方秦皮片制备工艺及质量标准研究[D].山东大学，2015.
　　[2]周军辉，谢斌，石新卫，韩桂军.多基原秦皮药材中秦皮甲素和秦皮苷的纯化工艺研究[J].西北药学杂志，2014，11（05）：449-452.
　　[3]付珊.秦皮质量控制方法研究[D].河北医科大学，2014.
　　[4]朱春胜，林志健，牛红娟，王雪洁，王红坡，孙小霞，王雨，周月，聂安政，肖明良，张冰.一测多评法测定菊苣中绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸B和异绿原酸A的量[J].中草药，2016，12（04）：666-670.

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