中药材秦艽主要吸收成分群研究

　　[摘要] 该研究通过制备大鼠外翻肠囊模型，并对其转运活性进行了确认，以秦艽中的马钱苷酸、当药苦苷、龙胆苦苷、以及当药苷为检测指标，用HPLC对经肠囊主动转运吸收后被吸收进入浆膜层的秦艽提取物中的主要成分群进行了分析，探讨了中药材主要吸收成分群的研究方法。结果表明所采用的大鼠外翻肠囊模型，在实验45 min内，组织结构完整，转运活性良好；HPLC的专属性和线性关系良好，精密度的RSD<5.5%；样品的萃取回收率均在90%以上；在室温条件下，样品的稳定性良好。秦艽提取物经肠囊主动转运后，在浆膜液样品中，检测到了8种主要成分；提取物的浓度对主要成分的吸收具有极其显著影响，而不同肠段对主要成分吸收的影响没有显著差异。由此可见，大鼠外翻肠囊技术可用于某些中药材的吸收成分群的研究，是一种探讨中药材活性成分的有效方法。
　　[关键词] 中药材；秦艽；外翻肠囊；HPLC；吸收成分群
　　[收稿日期] 2013-06-04
　　[基金项目] 国家“重大新药创制”科技重大专项（2009ZX09308-003，2009ZX09301-005，2009ZX09502-021）；中央级公益性科研究院所基本科研业务费专项（22070833）
　　[通信作者] 朱晶晶，E-mail：zhujj15@163.com
　　中医药是我国传统文化的瑰宝，长期中药研究实践表明中药具有成分众多、作用机制复杂的特点。如何从纷杂的成分中甄别主要有效成分，是中药临床实践中不可或缺的一个关键步骤。基于中药材可能存在着化学成分群>>吸收成分群>有效成分群的原则，中药材经胃肠道消化，并通过小肠吸收后的成分群将会直接影响着中药材的临床效果，因此，对于经口服方式发挥作用的中药来说，其消化性是决定该中药临床疗效的前提和基础，而对该中药经小肠吸收后的主要成分的定性、定量研究，是值得借鉴的中药材有效成分研究和评价的方法。本研究采用大鼠外翻肠囊（everted gut sac， EGS）模型[1-2]，并对肠囊的转运活性进行了确认；以中药材秦艽为研究对象，以其中的马钱苷酸、当药苦苷、龙胆苦苷、和当药苷为监测指标，用HPLC对秦艽提取物经空肠和回肠肠段主动转运吸收后，进入浆膜层一侧样品中的主要成分进行了分析，指认了吸收成分群中的部分主要成分。研究结果表明，大鼠外翻肠囊模型可以用来作为中药材吸收成分群研究与评价的有效方法。
　　1 材料
　　Wistar大鼠，雄性，体重（200±20）g，由北京维通利华实验动物有限公司提供。合格证号SCXK-（京） 2009-0017，上述动物均以标准颗粒饲料饲养。
　　Agilent1260高效液相色谱系统（包括四元泵、柱温箱、自动进样器、DAD检测器和Agilent ChemStation 工作站，Agilent公司）；Agilent6320 HPLC-MS质谱仪（Agilent公司）；BF-2000氮吹仪，PSAN-8氮气发生器（北京中惠普分析技术研究所）；混合氧气瓶（95%O₂，5%CO₂）。
　　氯化钾，氯化钠，碳酸氢钠，磷酸二氢钠，葡萄糖，氯化镁，氯化钙（分析纯，北京化学试剂公司），乙腈（色谱纯，Dikma公司），甲醇（色谱纯，Dikma公司），纯净水（杭州娃哈哈集团有限公司），乙酸（分析纯，北京化工厂）。
　　对照品龙胆苦苷（gentiopicroside，110770-201013）、当药苷（sweroside，111742-200501）、马钱苷酸（loganic acid，110770-201013），由中国食品药品检定研究院提供。当药苦苷（swertiamarian），由成都普思生物科技有限公司提供，纯度均大于98%。
　　秦艽（QinJiao， Genitana Macrophyllae Radix， GMR）药材，购自甘肃省天水，经上海中医药大学吴立宏副研究员鉴定为Gentiana crassicaulis Duthie ex Burk.的干燥根，符合《中国药典》（2010年版）秦艽项下规定的内容。
　　2 方法
　　2.1 样品制备
　　2.1.1 台氏液的制备 分别精密称取NaCl 8.0 g，KCl 0.28 g，NaHCO₃ 1.0 g，NaH₂PO₄ 0.05 g，MgCl₂ 0.1 g，溶于500 mL蒸馏水中，密闭冷藏；精密称取CaCl₂ 0.2 g，溶于500 mL蒸馏水中，密闭冷藏；临用前，在不断搅拌下，将后者与前者均匀混合，加入葡萄糖 1.0 g，调节pH 7.4即得。
　　2.1.2 混合对照品溶液的制备 分别精密取各对照品，用甲醇制备成一系列不同浓度的混合对照品溶液，对每个浓度的对照品，分别取200 μL混合溶液，加入200 μL台氏液；振荡混匀后，用氮气吹干，加200 μL甲醇，超声溶解；移取上清液，用0.22 μm滤膜滤过，备用。混合对照品溶液中，各对照品的质量浓度分别为马钱苷酸（8.78，70.14，175.4，350.7，701.4 mg·L^-1）、当药苦苷（2.83，5.66，11.32，22.64，11.32 mg·L^-1）、龙胆苦苷（10.01，50.05，100.1，200.2，2 002 mg·L^-1）、当药苷（2.83，5.66，11.32，22.64，56.6 mg·L^-1）。
　　2.1.3 供试样品的制备 将经氮气吹干后的供试样品，用200 μL甲醇，超声5 min，溶解，移取上清液，用0.22 μm滤膜滤过，备用。
　　2.2 大鼠外翻肠囊模型构建

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