余甘子叶药材的HPLC指纹图谱研究

　　[摘要] 目的 建立余甘子叶的指纹图谱。 方法 采用高效液相色谱法测定，乙腈-0.1%磷酸溶液梯度洗脱，流速1.0 ml/min，柱温25℃，紫外检测波长218 nm。 结果 余甘子叶中有15个共有峰被确定为指纹峰，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版》计算机软件评价10批余甘子叶指纹图谱的相似性，其结果均>0.9。 结论 该方法简便，稳定，精密度高，重现性好，可用于余甘子叶的鉴别，作为质量控制方法。
　　[关键词] 余甘子叶；高效液相色谱法；指纹图谱
　　[中图分类号] R284.1[文献标识码] A[文章编号] 1674-4721（2014）06（b）-0011-04
　　
　　Study on HPLC fingerprint analysis of Phyllanthus emblica L.
　　MAO Jian1 LIU Zhen-jie2▲
　　1.Department of Clinical medicine,People′s Hospital of Fuchuan County in Hezhou City of Guangxi Zhuang Autonomous Region,Fuchuan 542700,China;2.Conservation Center,Guangxi Institute of Medicinal Plant,Guangxi Zhuang Autonomous Region,Nanning 530023,China
　　[Abstract] Objective To establish a method of fingerprint analysis on Phyllanthus emblica L. by HPLC. Methods The chromatographic finger-prints were obtained by HPLC.The detective wave-length was set at 218 nm;the flow rate was 1.0 ml/min and the column temperature was maintained at 25℃. Results 15 co-possessing peaks were selected as the fingerprint peaks of Phyllanthus emblica L. and good similarities with correlation coefficients higher than 0.9 were found in fingerprints between the different samples of Phyllanthus emblica L. and the standard fingerprint. Conclusion The method with good reproducibility is simple and accurate,it can be used as an effective quality control method for Phyllanthus emblica L.
　　[Key words] Phyllanthus emblica L.;High performance of liquid chromatography;Fingerprint
　　余甘子叶（Phyllanthus emblica L.）系大戟科（Euphorbiaceae）叶下珠属（Phyllanthus）余甘子Phyllanthus emblical L.落叶小乔木或灌木的叶[1]，余甘子树在我国资源丰富，收载于1978年版《藏药标准》、1974年出版的《云南省药品标准》和多版《中华人民共和国药典》，别名有橄榄、滇橄榄、油甘子、山油甘、庵摩勒、牛甘子、喉甘子、杨甘等,余甘子果果实生食酸甜酥脆，初食味酸涩，后回味甘甜爽口，故名余甘[2]。余甘子味甘、酸、涩、性凉，具有化痰止咳，健胃消食，清热生津，保肝解毒等功效[3]。主治感冒发热、咳嗽、咽喉痛、白喉、烦热口干、消化不良、腹痛、慢性肝炎、高血压、肥胖症、高脂血症、湿热性水肿、尿频、血病、赤巴病、培根病、肝病、心脏病，以治疗血热血瘀引起的血病为长[4]。近年研究表明余甘子具有抗菌[5]、抗肿瘤[6]、抗氧化[7]、抗动脉粥样硬化[8-9]、抗乙型肝炎病毒[10]、保肝[11]、增强免疫[12-13]等作用。余甘子有多种化学成分，药理活性研究主要集中在多酚类成分上，槲皮素、没食子酸为其有效成分[14-15]。本实验对余甘子叶进行指纹图谱研究，以期对其质量控制和评价提供有效方法。
　　1 实验材料
　　1.1 仪器
　　Agilent1100高效液相色谱仪；含在线真空脱气机；高压四元梯度泵；可变波长检测器；二极管阵列检测器Agilent1100；Series色谱工作站（美国安捷伦科技公司）；SB3200T超声波清洗仪（上海能信超声有限公司）；BP211D电子分析天平（德国赛多利斯）。
　　1.2 试剂
　　甲醇、乙腈为色谱纯，乙酸乙酯、磷酸及其他试剂均为分析纯。水为超纯水。槲皮素对照品和没食子酸对照品由中国药品生物制品检定所提供（槲皮素对照品批号：110081-200406；没食子酸对照品批号：110831-200302）。
　　1.3 药材
　　实验所用余甘子叶药材于广西各地及云南玉溪收集，产地和采收时间见表1，经广西中医学院药用植物教研室刘寿养副教授鉴定为余甘子Phyllanthus emblica L.的干燥叶。
　　
　　表1 余甘子叶产地和批号
　　
　　
　　
　　
　　
　　
　　
　　
　　
　　
　　2 方法与结果
　　2.1 供试品溶液制备
　　取余甘子叶粗粉1.0 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加甲醇25 ml，密塞，称重量。静置1 h，超声30 min后放冷，补重，滤过，精密量取续滤液20 ml，挥干，残渣用25 ml水溶解至分液漏斗中，加入乙酸乙酯振摇提取3次，每次25 ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，置25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液为供试品溶液。
　　2.2 提取溶剂的考察
　　比较水、无水乙醇、甲醇等提取溶剂，结果表明以甲醇、无水乙醇提取时，所得的色谱图中的色谱峰数较多；余甘子叶的现代研究表明，没食子酸和槲皮素为余甘子叶的有效成分，所以以其没食子酸和槲皮素含量计算，用甲醇为溶剂，药材中没食子酸和槲皮素提取较完全[16]。经综合考虑，选定提取溶剂为甲醇。
　　2.3 超声时间的考察
　　样品分别超声20、30、40 min，结果表明，超声的时间为30 min以上，以其没食子酸和槲皮素含量计算，药材提取较完全。故选定提取时间为超声30 min。
　　2.4 色谱条件
　　色谱柱：Thermo Hypersil BDS C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）；流动相为乙腈-0.1%磷酸，梯度洗脱（表2）；柱温25℃；检测波长218 nm；进样量5 μl。
　　
　　表2 流动相梯度洗脱程序
　　
　　
　　
　　
　　2.5 方法学考察
　　2.5.1 精密度试验取批号为200701药材，制备供试品溶液，连续进样5次，各色谱峰的相对保留时间RSD<1.42%，相对峰面积RSD<2.94%，结果表明，仪器的精密度良好。

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