牛髓药材中蛋白质含量测定方法

　　[摘要] 目的 建立全自动定氮仪法测定牛髓药材中蛋白质含量。方法 常量凯氏定氮法。结果 氮含量在0.256 2～3.843 0 mg范围内，与滴定液消耗体积呈良好的线性关系，r=0.999 9；平均回收率为100.0%（n=9），RSD=1.1%。结论 该法简便，准确，重现性好，可作为牛髓药材中蛋白质含量的测定方法。
　　[关键词] 牛髓；蛋白质；含量测定
　　[中图分类号] R248 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2017）12（b）-0136-02
　　[Abstract] Objective To test the protein content of ox spinal cord by the automatic nitrogen determination method. Methods Constant Kjeldahl determination was established. Results The nitrogen content was between 0.256 2 and 3.843 0 mg， showing a good liner correlation with the volumetric solution consumption volume r=0.999 9； and the average recycling rate was 100.0%（n=9）， RSD=1.1%. Conclusion The method is simple and accurate with good repeatability， which can be used as a measurement method of protein content of ox spinal cord.
　　[Key words] Ox spinal cord； Protein； Content measurement
　　牛髓为牛科野牛属动物黄牛Bos taurus domesticus Gmelin或水牛属动物水牛Bubalus bubalis Linnaeus 的骨髓。牛髓，史载于《神农本草经》《本草纲目》等古代医药经典著作，记载了该品的药用功效，我国现代医药著作《中华本草》《中药大辞典》《中国动物药资源》中均有记载该药材，详细描述了该品的来源、原形态、生境分布、化学成分、药理作用、性味、归经、功能主治及用法用量。具有补血益精，止渴，止血，止带之功效。常用于精血亏损，虚劳羸瘦，消渴，吐衄，便血，崩漏，带下[1]。
　　现代研究表明，牛髓含有蛋白质、脂肪、灰分、维生素B1、维生素BZ、尼克酸，其脂肪酸含月桂酸、肉豆酸、棕榈酸、硬脂酸、亚油酸等。牛脊髓富含蛋白质，氨基酸组成比猪肉更接近人体需要，能提高机体抗病能力，对生长发育及术后，病后调养的人在补充失血、修复组织等方面特别适宜，寒冬食牛肉可暖胃，是该季节的补益佳品；牛脊髓有补中益气，滋养脾胃，强健筋骨，化痰息风，止渴止涎之功效，适宜于中气下隐、气短体虚、筋骨酸软、贫血久病及面黄目眩之人食用；牛脊髓能安胎补神，能安中益气、健脾养胃、强筋壮骨。
　　目前国内具备批准文号的3个中成药品种血宝片、血宝胶囊、益血生胶囊处方中均含有该药材，成药品种均有完善的国家标准，但处方中牛髓药材无现行国家标准及地方标准，无法控制药材质量，严重制约了该品种的深入开发。且牛髓本身为动物鲜用组织，取用保存不当，极易影响药材质量。企业急切期待制订牛髓药材的质量控制标准。完善该药材的质量标准，控制药材质量，才能更好地保证中成药的质量、保障人民用药安全，同时也可为牛髓药材的开发和广泛应用提供质量保证。由于牛脊骨和腿骨均有髓腔，其中均有骨髓分布，有的企业以脊骨骨髓入药，有的企业以腿骨骨髓入药，由于基源记载中未规定骨髓来源，故二者均需作为研究对象。该文参照中国药典氮测定法对其进行了氮含量测定研究。实验结果表明所建立方法易于操作，结果准确，重现性良好，可作为牛髓药材蛋白质含量的质控方法。
　　1 仪器与试药
　　FOSS 8400型自动定氮仪；硫酸滴定液（0.005 mol/L，F值为 1.011）为购买后稀释[精密量取硫酸滴定液（0.05 mol/L，F值为1.011）100 mL，置1 000 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀]；硫酸铵（来源：天津市科密欧化学试剂有限公司，纯度：99.95%～100.05%，基准试剂）硫酸为分析纯，消化剂为FOSS公司提供。牛髓药材为自行购买，分别购自长春、内蒙、延边、吉林地区。
　　2 测定方法
　　供试品溶液的制备：取本品0.1 g，精密称定，置消化管中，分别加硫酸3 mL，消化剂0.6 g，置消化炉上，420℃消化，至溶液呈澄明的的绿色后，继续加热10 min，放冷，备用。
　　测定法：将盛已消化样品的凯氏定氮瓶安装在定氮仪上，加40%氢氧化钠溶液30 mL，硼酸吸收液30 mL，水30 mL，进行自动蒸馏和滴定。并将滴定结果用空白试验校正。
　　3 方法验证
　　3.1 耐用性考察
　　供试品溶液制备方法的选择参考中国药典2015年版四部[2]氮测定法，对供试品制备条件进行筛选：取本品（批号20170225）0.1 g，4份，精密称定，置消化管中，分别加硫酸10 mL、5 mL、3 mL、2 mL，分别加消化剂0.6 g，置消化炉上，420℃消化，依法测定。结果见表1，显示测定结果与加硫酸量无显著差异，不同硫酸用量均能够完全消化样品，该法采用加酸量为5 mL。
　　3.2 专属性考察
　　取空白管同法消化、测定，作为阴性对照（定氮仪测定时自动扣除空白）。
　　3.3 线性关系考察
　　精密称取硫酸铵0.120 9 g（含氮为25.62 mg），置100 mL容量瓶中，加水溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取1、3、5、7、10、15 mL，置于全自动定氮仪上进行蒸馏滴定，以氮含量（mg）为横坐标，滴定液消耗量为纵坐标计算回归方程，结果见表2。结果表明氮含量在0.256 2～3.843 0 mg范围内，与滴定液消耗体积呈良好的线性关系。
　　3.4 重复性考察
　　精密称取样品0.08、0.10、0.12 g，每个浓度取3份，照上述方法独立制备9份供试品，分别测定结果见表3，结果表明本方法重复性良好。
　　3.5 回收率试验
　　精密称取供试品0.05g，共称9份，精密加入硫酸铵标准溶液（每1豪升含氮0.712 mg）0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL各3份，照上述方法測定，计算方法回收率，结果显示该方法加样回收率较好，见表4。
　　3.6 样品测定
　　精密称取供试品0.1 g，照上述方法分别测定12批牛髓样品蛋白质含量，结果见表5。
　　4 讨论
　　实验结果显示，采用全自动常量凯氏定氮法，测定牛髓药材中蛋白质含量。方法简便，准确，重现性好，准确度高，并且样品中的油脂等其他成分不影响测定结果，可作为牛髓药材中蛋白质含量的准确测定方法。
　　[参考文献]
　　[1] 南京中医药大学.中药大辞典[S].上海：上海科学技术出版社，2006：403.
　　[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：2015年版四部[S].北京：中国医药科技出版社，2015：88.
　　（收稿日期：2017-09-14）

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