HPLC测定不同采收期川芎药材中5种药效成分的含量

　　[摘要]该文建立了HPLC同时测定川芎药材中阿魏酸、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A和藁本内酯含量的方法。用40%乙醇提取样品中的药效成分，采用Symmetry C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，0～5 min，乙腈-甲醇-1%冰醋酸（20∶40∶40），5～30 min，乙腈-甲醇-1%冰乙酸（60～100∶0∶40～0）为流动相，流速l mL·min-1，检测波长0～4.3 min，321 nm，4.31～30 min，275 nm，柱温35 ℃，进样体积10 μL，应用安捷伦1100系列液相色谱仪进行测定。5种药效成分的分离效果良好，在相应的浓度范围内与峰面积有良好的线性关系，相关系数均大于0.99，加样回收率（n=6）均在94.44%～103.1%。该方法应用于研究都江堰产区（海拔600 m左右）不同采收期对川芎阿魏酸和4种内酯类物质含量的影响，试验在4月15日（栽后245 d）至5月30日（290 d）内设置了10个采收期，发现5种药效成分的含量与采收期（栽后天数）均呈二次或三次函数关系，随着采收期的推迟而先增后减，阿魏酸、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A和藁本内酯的含量在栽后260 ～265 d（4月30日至5月5日）最高。
　　[关键词]川芎；HPLC；采收期；含量
　　川芎Ligusticum chuanxiong Hort.为伞形科藁本属多年生草本植物，以根茎入药，味辛、性温，具有活血行气、祛风止痛等功效^[1]。川芎的主要药效成分包括阿魏酸、总生物碱、内酯类化合物、挥发油和酚性成分等物质^[2-3]。
　　目前川芎的质量评价主要以《中国药典》2010年版（一部）的质量规范为标准，对川芎性状、阿魏酸的含量（≥0.1%）、水分（≤12%）、总灰分（≤6%）、酸不溶性灰分（≤2%）、浸出物（≥12%）做了相关规定^[1]。仅以阿魏酸一种药效成分来评价川芎品质的高低有失偏颇，作者一致认为加之其他药效成分综合评价更为合理。如今测定阿魏酸单一成分含量的方法较多^[4-9]，也有单一测定藁本内酯的方法^[10]，或阿魏酸与川芎嗪、阿魏酸与藁本内酯2种成分同时测定的方法^[11-12]，还有一些有关成分测定和川芎指纹图谱建立的方法[5-6，13-16]，总之，这些方法只是单一成分及少数成分的定量测定，或是指纹图谱中没有确定具体成分、结构及药效作用，只是对所测的材料确定了共有峰的数量及相对面积大小（不能代表药材中的真实含量），且存在耗时较长和溶液消耗较多的缺点，均不利于对川芎药材品质的综合评价，需要建立一套能同时测定多种药效成分的快捷、高效而可靠的分析方法，以便全面、正确地综合评价川芎药材的品质。
　　另外，不同的采收期对川芎的品质影响较大，蒋桂华和饶凡^[17-18]等对川芎的采收期有过研究，遗憾的是其涉及的采收期较少或只测定阿魏酸、生物碱和挥发油3个指标的含量，不足以筛选川芎的最适采收期；近年来，随着种植结构和耕作制度的改变，川芎的收获期逐渐提前，位于四川彭山县的川芎产区也是杂交水稻的制种区，为保证制种水稻提前栽秧，川芎的采收期提前到了4月上中旬；位于都江堰和彭州市的川芎主产区，主要实行的是川芎-水稻轮作制，为了提高水稻产量，所选用水稻品种的生育期呈延长之势，也在一定程度上影响了川芎的适时收获。因此，系统研究川芎采收期特别是早收对川芎品质的影响可为川芎的生产提供理论依据。
　　本文建立了HPLC同时测定川芎药材中阿魏酸、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A和藁本内酯含量的方法，为川芎药材及相关产品的品质评价提供新的方法参考，同时研究川芎采收期对川芎品质的影响对川芎的优质高产栽培及川芎-水稻轮作制度有重要意义。
　　1材料
　　安捷伦1100 LC系列液相色谱仪，ChemStation 化学工作站、VWD检测器；CAP 225D电子天平（德国赛多利斯科学仪器有限公司），SB-5200 DTD超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）。
　　试验材料培养于川芎药材采收期试验田，川芎苓种来自都江堰市三江镇，2011年8月10日栽种在都江堰市石羊镇广益村试验田，土地平整，地力均一，pH为5.83，碱解氮58.34 mg·kg-1，速效磷114.27 mg·kg-1，速效钾42.31 mg·kg-1，有机质23.82 g·kg-1。试验采用单因素随机区组设计，设置10个采收期，分别为2012年4月15日（栽后245 d，下同）、2012年4月20日（250 d）、2012年4月25日（255 d）、2012年4月30日（260 d）、2012年5月5日（265 d）、2012年5月10日（270 d）、2012年5月15日（275 d）、2012年5月20日（280 d）、2012年5月25日（285 d）和2012年5月30日（290 d）。重复3次，共30个处理，试验小区面积为20 m²。施肥^[19]、密度^[20]及其他栽培管理措施保持小区间一致。
　　甲醇（HPLC级）和乙腈（HPLC级）购买于赛默飞世尔科技股份有限公司，乙醇（HPLC级）和冰乙酸（AC级）购买于成都科龙化工试剂厂，超纯水由娃哈哈纯净水（杭州娃哈哈集团有限公司）代替，标准对照品阿魏酸和藁本内酯购买于中国食品药品检定研究院，洋川芎内酯I、洋川芎内酯H和洋川芎内酯A购于四川省中药标准中心。
　　2方法与结果
　　2.1色谱条件
　　Symmetry C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为0～5 min，乙腈-甲醇-1%冰醋酸（20∶40∶40），5～30 min，乙腈-甲醇-1%冰乙酸（60～100∶0∶40～0）；流速l mL·min-1；检测波长0～4.3 min，321 nm，4.31～30 min，275 nm；柱温35 ℃，进样体积10 μL。

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